邹 毅，潘建萍，周 敏

(赣南卫生健康职业学院，江西赣州 341000)

摘 要：研究江香薷中抑制α-葡萄糖苷酶活性成分，采用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱色谱、重结晶等方法从江香薷乙酸乙酯部位分离纯化出单体化合物，根据化合物理化性质及波谱数据鉴定化学结构，采用4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)法进行α-葡萄糖苷酶抑制活性评价。结果表明，从江香薷乙酸乙酯部位分离得到7个化合物，分别为南烛树脂酚(1)、(-)-5-甲氧基异落叶松树脂素((-)-5-methoxyisolariciresinol)(2)、松脂醇(Pinoresinol)(3)、isoeucommin A(4)、丁香树脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Episyringaresinol-4-O-β-D-glucopyranoside)(5)、槲皮素(6)、山奈酚(7)，化合物1～5为首次从该植物中分离得到。体外α-葡萄糖苷酶抑制活性实验结果显示，化合物1、7对α-葡萄糖苷酶的抑制率达到86%以上，50分别为(47.15±0.41)mg/L、(42.34±0.62)mg/L，化合物6的抑制率为94.11%，50是(39.28±0.30)mg/L，活性与阳性对照组Acarbose相当。化合物1为竞争性抑制，化合物6、7为非竞争抑制。

关键词：江香薷;化学成分;α-葡萄糖苷酶抑制活性

江香薷(Mosla chinensis)为唇形科石荠苎属植物，以干燥地上部分入药，属药食同源品种，为江西省的大宗药材之一，主产于新余市分宜县和渝水区等地。江香薷味辛，微温，具有发汗解表，化湿和中的功效，可用于治疗暑湿感冒、恶寒发热、头痛无汗、腹痛吐泻、水肿、小便不利等病症[1]。国内外关于该植物的形态、资源、化学成分及生物活性研究报道较多，且发现该植物包含挥发油、生物碱、苷类、多糖、黄酮等多种化学成分，具有抗菌、调血脂、降糖、抗氧化、提高免疫力等药理活性[2-3]。然而，目前研究多集中于具有抗炎、抗病毒等活性的挥发油成分的研究，对于其他成分的药理活性研究报道甚少。α-葡萄糖苷酶抑制剂(AGI)是治疗Ⅱ型糖尿病(DM)常用的口服药物，目前已上市的有阿卡波糖、伏格列波糖等，但其胃肠道方面副作用明显，从天然产物中筛选新的AGI的研究越来越受到广泛关注。本课题组从江香薷中分离了7个化合物，并从中筛选出具有较强抑制α-葡萄糖苷酶活性的化合物。

1 材料及仪器

江香薷全草于2020年采自新余市分宜县，全草性状符合相关文献描述[2]，经赣南医学院副教授胡海波鉴定为江香薷(Mosla chinensis)。

Inova 500型核磁共振仪，TMS内标;Shimadzu LC-6AD液相色谱仪，制备柱YMC-Pack ODS-A;HP-20大孔吸附树脂;LH-20型葡聚糖凝胶，Amersham Pharmacia Biotech公司;反相硅胶柱，日本YMC公司;柱色谱硅胶G;硅胶GF254;试剂为色谱纯或分析纯级别;MK3酶标仪(Thermo Lab systems公司);96孔板(上海一研生物科技有限公司);PNPG、阿卡波糖(纯度≥98%)，上海研生实业有限公司。

2 提取分离

将6 kg干燥的江香薷地上部分切碎，用95%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压浓缩至无醇味后得乙醇总浸膏。将总浸膏加水混悬，分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。乙酸乙酯部位(38 g)经硅胶柱色谱(氯仿∶甲醇，1∶0→1∶1)梯度洗脱得到8个组分(A-H)。B组分(3.3 g)经硅胶柱色谱(石油醚∶乙酸乙酯，3∶1)、Sephadex LH-20柱色谱(甲醇)和制备液相色谱得化合物1(8.5 mg)、化合物2(5.2 mg)和化合物3(7.5 mg)。C组分(8.3 g)经硅胶柱色谱和制备液相色谱分别得化合物6(2.8 mg)和化合物

7(3.7 mg)。E组分(6.6 g)经Sephadex LH-20柱色谱(甲醇)、硅胶柱色谱(氯仿-甲醇-水，10∶1∶0.1)得到化合物4(3.8 mg)和化合物5(5.6 mg)。

3 化合物鉴定

从江香薷乙酸乙酯部位分离得到的化合物依据实验测试结果，鉴定结果如下，化合物结构如图1所示。

(1)化合物1。白色粉末，ESI-MS：435[M+H]+。1H-NMR(MeOH-4，500 MHz)：6.60(1H，s，H-2′)，

6.40(1H，s，H-2，6)，4.32(1H，d，=5.5 Hz，H-7)，2.71，2.59(each1H，m，H-7′)，1.98(1H，m，H-8)，1.64(1H，m，H-8′)，3.60(2H，m，H-9)，3.51(2H，m，H-9′)，3.87(3H，s，3′-OMe)，3.75(6H，s，3，5-OMe)，3.39(3H，s，5′-OMe)，4.84，4.40(2H，t，-CH2OH)。13C-NMR(MeOH-4，125 MHz)δ：139.3(C-1)，106.9(C-2，6)，149.0(C-3，5)，134.5(C-4)，42.3(C-7)，49.8(C-8)，64.2(C-9)，130.2(C-1′)，107.8(C-2′)，148.7(C-3′)，138.3(C-4′)，147.7(C-5′)，126.2(C-6′)，33.6(C-7′)，40.9(C-8′)，66.8(C-9′)，56.8(3，5-OMe)，60.1(3′-OMe)，56.6(5′-OMe)。以上数据与文献[3]报道一致，鉴定该化合物(+)lyoniresinol(南烛树脂酚)。

(2)化合物2。白色粉末，ESI-MS：383[M+Na]+，359[M-H]-。1H-NMR(DMSO-6，500 MHz)：6.62(1H，d，=1.5 Hz，H-2)，6.67(1H，d，=8 Hz，H-5)，6.47(1H，dd，=8，1.5 Hz，H-6)，3.73(1H，d，=9.5 Hz，H-7)，1.83(1H，m，H-8)，6.59(1H，s，H-2′)，6.07(1H，s，H-5′)，2.71～2.61(2H，m，H-7′)，1.60(1H，m，H-8′)，3.43(2H，m，H-9)，3.14(1H，m，H-9′)，3.56(1H，m，H-9′)，3.68(3H，s，OMe-3)，3.69(3H，s，OMe-3′)，8.42，8.73(2H，s，Ar-OH)，4.84，4.40(2H，t，-CH2OH);13C-NMR(DMSO-6，125 MHz)：127.1(C-1)，111.8(C-2)，145.5(C-3)，144.1(C-4)，116.2(C-5)，132.5(C-6)，32.3(C-7)，38.0(C-8)，63.5(C-9)，136.2(C-1′)，106.6(C-2′)，147.8(C-3′)，133.7(C-4′)，147.6(C-5′)，106.6(C-6′)，46.5(C-7′)，45.7(C-8′)，59.7(C-9′)，55.5(OMe-3)，56.0(OMe-3′，5′)。以上数据与文献[4]报道一致，鉴定该化合物为(-)-5-甲氧基异落叶松树脂素((-)-5-methoxyisolariciresinol)。

(3)化合物3。无色油状，ESI-MS：381[M+Na]+，1H-NMR(500 Mz，CDCl3)：6.80～6.89(6H，Ar-H)，4.78(2H，d，=4.0 Hz，H-7，7′)，4.28(2H，dd，=9.0，7.0 Hz，H-9a，9a′)，3.91(2H，dd，=9.0，7.0 Hz，H-9b，9b′)，3.96(6H，s，3，3′-OCH3)，3.15(2H，m，H-8，8′)。13C-NMR(150 Mz，CDCl3)：133.1(C-1，1′)，108.7(C-2，2′)，146.8(C-3，3′)，145.4(C-4，4′)，114.4(C-5，5′)，119.1(C-6，6′)，86.0(C-7，7′)，54.3(C-8，8′)，71.8(C-9，9′)，56.1(3，3′-OCH3)。以上数据与文献[5]报道一致，鉴定该化合物为pinoresinol(松脂醇)。

(4)化合物4。白色粉末，1H-NMR(500 Mz，MeOH-4)：7.02(1H，brs，H-2)，7.14(1H，d，=8.0 Hz，H-5)，6.91(1H，d，=8.0，1.5 Hz，H-6)，6.65(2H，s，H-2′，6′)，4.75(1H，brs，H-7)，4.71(1H，brs，H-7′)，4.25，3.88(each 1H，m，H-9)，3.68，3.40(each 1H，m，H-9′)，3.12(2H，brs，H-8，8′)，3.86(3H，s，3-OCH3)，3.84(6H，s，3′，5′-OCH3)，4.87(1H，d，=7.0 Hz，Glc-1)。13C-NMR(125 Mz，MeOH-4)：136.2(C-1)，111.6(C-2)，151.0(C-3)，147.5(C-4)，118.0(C-5)，119.8(C-6)，87.0(C-7)，55.5(C-8)，72.8(C-9)，133.1(C-1′)，104.5(C-2′，6′)，149.3(C-3′，5′)，137.5(C-4′)，87.6(C-7′)，55.5(C-8′)，72.7(C-9′)，56.8(3-OCH3)，56.8(3′，5′-OCH3)，102.8(Glc-1)，74.9(Glc-2)，77.8(Glc-3)，71.3(Glc-4)，78.2(Glc-5)，62.5(Glc-6)。以上数据与文献[6]报道一致，鉴定该化合物为isoeucommin A。

(5)化合物5。白色粉末，1H-NMR(500 Mz，DMSO-6)

：6.67(2H，brs，H-2，6)，6.61(2H，s，H-2′，6′)，4.71(1H，brs，H-7)，4.63(1H，brs，H-7′)，4.19，3.80(each 2H，m，H-9，9′)，3.06(2H，brs，H-8，8′)，3.77(6H，s，3，5-OCH3)，3.76(6H，s，3′，5′-OCH3)，4.90(1H，d，=7.0 Hz，Glc-1)。13C-NMR(125 Mz，DMSO-6)：137.3(C-1)，103.7(C-2，6)，152.7(C-3，5)，133.8(C-4)，85.1(C-7)，53.7(C-8)，71.3(C-9)，131.3(C-1′)，102.7(C-2′，6′)，148.0(C-3′，5′)，135.0(C-4′)，85.4(C-7′)，53.7(C-8′)，71.2(C-9′)，56.5(3，5-OCH3)，56.1(3′，5′-OCH3)，104.2(Glc-1)，74.2(Glc-2)，76.6(Glc-3)，71.2(Glc-4)，77.3(Glc-5)，61.0(Glc-6)。以上数据与文献[7]报道一致，鉴定该化合物为丁香树脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(episyringaresinol-4-O-β-D-glucopyranoside)。

(6)化合物6。黄色粉末，1HNMR(400 MHz，DMSO)：7.67(1H，d，=2.0 Hz，H-2′)，7.55(1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-6′)，6.89(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.39(1H，brs，H-8)，6.18(1H，brs，H-6)，以上数据与文献[8]报道一致，鉴定该化合物为槲皮素(quercertin)。

(7)化合物7。黄色粉末，1HNMR(400 MHz，DMSO)：8.04(1H，d，=8.0 Hz，H-2′，6′)，6.91(1H，d，=8.0 Hz，H-3′，5′)，6.40(1H，brs，H-8)，6.16(1H，brs，H-6)，以上数据与文献报道一致，鉴定该化合物为山奈酚(kaempferol)。

4 抑制α-葡萄糖苷酶活性的筛选

参考文献[9]方法，以PNPG为底物，在96微孔板上测定α-葡萄糖苷酶活性，并用阿卡波糖作为阳性对照。取102 μL磷酸钾缓冲液(pH6.8)，加入6 μLDMSO，15 μLα-葡萄糖苷酶(0.1 U/mL)，恒温(37 ℃)反应10 min，加入15 μLPNPG(1.2 mmol/L)，恒温(37 ℃)反应10 min，加60 μLNa2CO3，在405 nm 波长处测吸光度值。计算酶活性抑制率=[1-(样品组-样品空白组)/(阴性组-空白组)]×100%，用Origin6.0求对应的50。酶活性抑制作用结果见表1，由表可知，化合物1、6、7对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用较强，其抑制率分别为88.57%、94.11%、90.18%。50分别为(47.15±0.41)mg/L、(39.28±0.30)mg/L、(42.34±0.62)mg/L。

5 酶抑制类型的确定

分别取化合物1、6、7两个不同浓度，PNPG取4个不同浓度，根据Lineweave-Burk作图法，分别绘制3个化合物的抑制作用动力学曲线，见图2、图3和图4。

由上图可知，化合物1对α-葡萄糖苷酶抑制作用为竞争性抑制，化合物浓度增大而反应速度max不变，根据竞争性抑制动力学方程计算其Ki为37.6 mg/L。化合物6、7则属于非竞争性抑制剂，max随浓度的增大而减小，根据非竞争性抑制动力学方程求出2个化合物的Ki分别为

156.2 mg/L、3.09 mg/L。

6　结论

目前对于江香薷多集中于具有抗炎、抗病毒等活性的挥发油成分的研究，而本课题首次利用体外筛选模型对江香薷乙酸乙酯萃取物抑制α-葡萄糖苷酶活性成分进行了研究，从中分离鉴定出7个化合物。其中，化合物1～5为首次从该植物中分离得到。利用96微孔板PNPG法评价化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性，筛选出较强抑制酶活性的化合物1、6、7，其中化合物1属于竞争性抑制，化合物6、7属于非竞争性抑制。本研究有助于加快江香薷资源的现代化开发，并为深入研究天然AGI药物提供方向。

参考文献

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[5]王瑞,童玲,师彦平.芫花中1个新的四氢呋喃型木脂素[J].中草药,2016,47(14):2408-2411.

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作者简介：邹毅(1983—)，男，江西瑞金人，硕士，讲师。研究方向：天然药物活性物质产业化开发。