UPLC-MS/MS法测定畜肉中莱克多巴胺

2021-08-30 13:57:17 来源：食品安全导刊

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覃弘毅

（南宁市食品药品检验所，广西南宁 530000）

作者简介：覃弘毅（1992—），男，壮族，广西河池人，本科，助理工程师。研究方向：食品质量安全检测。

摘要：建立了超高效液相色谱-串联质谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，UPLC-MS/MS）测定畜肉中莱克多巴胺的分析方法，样品经提取后通过PCX固相萃取柱净化。经C18色谱柱分离后，通过电喷雾离子源正离子模式（ESI+）进行多重反应离子监测（MRM）。以内标法定量。结果表明，莱克多巴胺的线性范围为0.5～10.0 ng/mL，相关系数r为0.999 77，定量限为0.25 μg/kg，加标回收率在100.2%～105.6%，相对标准偏差RSD（n=6）为4.0%～5.4%。本方法灵敏度高、操作简单、检测结果准确，可用于畜肉中莱克多巴胺的定量及确证分析。

关键词：畜肉；莱克多巴胺；超高效液相色谱-串联质谱

莱克多巴胺是一种人工合成的β-肾上腺受体激动剂，在临床上主要用于治疗支气管哮喘、充血性心力衰竭症和肌肉萎缩症等。在饲料中添加莱克多巴胺可使动物快速增长，减少脂肪含量，提高瘦肉率。2021年的3·15晚会曝光河北沧州青县“瘦肉精”羊肉流入郑州的新闻，其中检出的“瘦肉精”就是莱克多巴胺。若此类肉制品被消费者所食用，会对其身体健康造成损害[1]。

目前我国主要推荐使用GB/T 22286—2008进行畜肉中莱克多巴胺的监督抽检，但标准中实验步骤相对繁杂，耗时较长，对于技术人员实验操作要求较高。为此，需建立一种稳定性、重复性好，且效率较高的测定方法[2-4]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

莱克多巴胺标准溶液（100 μg/mL，Alta）、莱克多巴胺D3标准溶液（100 μg/mL，Alta），PCX固相萃取柱

（60 mg/3 mL，Agela）、β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶

（100 000 units，CNW）、甲醇（HPLC级，Merck）、乙腈（HPLC级，Merck）、乙酸铵（HPLC级，CNW）、甲酸（HPLC级，CNW）、氨水（HPLC级，CNW）、超纯水（Milli-Q制备）

1.2 仪器与设备

AB Sciex TripleQuad 4500三重四极杆质谱仪、Agilent Infinity 1290II超高效液相色谱仪、IKA MS3涡旋振荡器、Sigma 2-16 KL冷冻离心机、Biotage TurboVap 全自动样品浓缩仪、梅特勒 XS205DU电子天平

1.3 样品处理

称取2 g试样于50 mL离心管中，加入8 mL乙酸铵溶液（pH=5.2），混匀，再加入100 μL内标溶液（100 ng/mL）和50 μLβ-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶，于37 ℃下振荡16 h。再加入高氯酸调节pH值到1.0，于8 000 r/min下离心5 min，取全部上清液过PCX柱（依次用3 mL甲醇、

3 mL水活化平衡），控制流速在3 mL/min，依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗小柱，弃去淋洗液，抽干，用2 mL5%氨水甲醇洗脱。洗脱液于50 ℃下氮吹至干，加入1 mL5%甲醇水溶液，涡旋10 s混匀，过0.22 μm滤膜，上机处理。

1.4 仪器条件

1.4.1　色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse plus（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）；流速：0.4 mL/min；进样体积：5 μL；柱温：35 ℃；流动相A：0.1%甲酸水；流动相B：0.1%甲酸乙腈；梯度洗脱程序：

0～1 min，90%A；1～1.1 min，90%～80%A；1.1～2.2 min，80%A；2.2～2.8 min，80%～5%A；2.8～3.3 min，5%A；3.3～3.4 min，5%～90%A；3.4～4.0 min，90%A。

1.4.2　质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI+）；扫描模式：多反应离子监测（MRM）；温度（TEM）：550 ℃；喷雾电压（IS）：5 500 V；气帘气（CUR）：30 psi；雾化气（GS1）：55 psi；辅助加热气（GS2）：55 psi。莱克多巴胺及其内标的质谱参数见表1，莱克多巴胺及其内标的提取离子色谱图见图1。

2 结果与分析

2.1 内标的选择

在现行标准中使用较多的GB/T 22286—2008，采用沙丁胺醇D3作为莱克多巴胺的内标进行计算。然而由于性质上存在差异，其回收率不高，且不稳定，因此本次实验采用莱克多巴胺的同位素氘代物作为内标，其在性质上更接近本体，因此回收率更好、更加稳定。

2.2 前处理条件的优化

GB/T 22286—2008实验步骤中，经高氯酸调节pH后的样品溶液，需使用氢氧化钠溶液调节pH，使莱克多巴胺转化为分子态，再经异丙醇-乙酸乙酯溶液萃取浓缩，复溶后作为固相萃取上样溶液。本次实验直接使用经高氯酸调节pH后的样品溶液作为上样溶液，省去了国标方法中的后续步骤，节省前处理时间。根据实验原理，高氯酸调节pH为酸性后，莱克多巴胺已成离子状态[5]，满足PCX对上样溶液中目标物形态的要求，确保能够吸附目标物。实验结果表明，该方法的灵敏度及准确度也未受到明显影响。

2.3 线性范围、定量限、回收率和精密度

精密移取莱克多巴胺和莱克多巴胺D3标准品溶液适量，相应稀释成0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、

5.0 ng/mL和10.0 ng/mL，其中各工作曲线溶液中内标的浓度为10 ng/mL。依次上机测定，拟合线性回归方程见图2，为y=0.201 89x-7.582 13×10-4。

在空白样品中加入适量标准品溶液。经测定后，以满足信噪比（S/N）＞10且添加回收率RSD（n=6）≤20%的最小加标水平作为本方法的定量限（LOQ）。分别按LOQ、5倍LOQ、10倍LOQ这3个加标水平进行加标实验，每个浓度水平设置6个平行试样，结果均满足GB/T 27404—2008中关于方法确认的要求[6]，详见表2。

2.4 实际样品测定

取100份样品作为实际样品测试，其中50份为猪肉、30份为牛肉、10份为羊肉、10份为猪肝，均未检出莱克多巴胺。盲样测试结果为4.82 μg/kg，准确度为109%。