超高效液相色谱法测定茶叶中的儿茶素

2021-08-15 21:40:35 来源：

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　　超高效液相色谱法测定茶叶中的儿茶素

　　崔利辉 '.胡娜 2，李璐琦

　　（1.杨凌职业技术学院，陕西杨凌 712100;2.铜川市食品药品检验检测中心，陕西铜川727000;

　　3.西北农林科技大学生命科学大型仪器共享平台，陕西杨凌 712100）

　　基金项目：2020年杨凌职业技术学院校内基金项目'‘食品中多种抗氧化剂的快速检测研究"（ZK20-61）。作者简介：崔利辉（1987—）,男，汉族，陕西杨凌人，硕士，助教。研究方向：食品质量安全检测。

　　摘要：建立超高效液相色谱法测定茶叶中7种儿茶素类茶多酚，通过调整流动相乙<-0.1%甲酸溶液梯度，优化了分离度，进行了加标回收试验，结果表明，在10 - 100 ug/mL范围内，7种儿茶素的峰面积呈现良好的线性关系，相关系数不低于0. 999,检出限为6.1 ~ 97.8 mg/kg,加标回收率93. 1 ~ 96.8%,相对标准偏差在1. 7% ~ 3.3%。该方法具有分析时间短，回收率、精密度高的优点。

　　关键词∶超高效液相色谱;儿茶素;茶叶

　　茶叶中富含多种营养成分『气有效成分的含量和种类对茶叶的品质至关重要。茶叶中主要的抗氧化活性成分为茶多酚伊勺，约占茶叶干重的20%〜30%。除此之外，茶多酚还具有抗氧化、抗癌、抑菌、降压和降脂团等保健功效。茶多酚主要包括黄酮类、黄酮醇、儿茶素类、黄青素类、酚酸类等物质，其中儿茶素类含量最高，占茶多酚的 60%〜80%。儿茶素回包括儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素、没食子酸和咖啡因等。

　　茶多酚中儿茶素类化合物的检测方法多为液相色谱法，如GB/T 8313—2018,高效液相色检测方法分析时间较长，试剂消耗量较大。本研究在此基础上，利用超高效液相色谱法建立了同时测定7种儿茶素茶多酚定量方法，方法分析速度快，操作简单，可用于茶叶中儿茶素类的测定。

　　1材料与方法

　　1.1仪器与设备

　　LC30A超高效液相色谱仪（日本岛津公司）、MS3涡旋震荡器（德国IKA公司）、Allegra64R低温高速离心机（美国贝克曼公司）、ME204电子天平（瑞士梅特勒公司）。

　　1.2材料与试剤

　　乙睛、甲醇（HPLC级，美国天地），甲酸（HPLC级，阿拉丁），水（实验室自制超纯水）。对照品：没食子酸、表没食子儿茶素、儿茶素、咖啡碱、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯（纯度>98%，北京坛墨质检）

　　1.3实验方法

　　1.3.1标准溶液的制备

　　混合标准溶液：准确称取各标准物50 mg,混合后用甲醇溶解稀释定容至50 mL,配制成浓度为l.OOmg/mL的混合标准储备液；分别取1 .OmL、2.0 mL、5.0 mL、8.0 mL 和10.0 mL储备液用甲醇稀释定容至100 mL,配制成浓度为 10.0 ng/mL> 20.0 ng/mL、50.0 p.g/mL> 80.00 ng/mL 和 100.0 ng/mL系列混合标准工作液。

　　1.3.2样品处理

　　称取约0.2 g（0.000 1 g）茶叶样品于10 mL离心管中，加入5 mL 70%甲醇，40 °C下超声提取30 min（每间隔10 min 涡旋1 min） , 8 000 r/min离心5 min,重复提取1次，合并两次溶液于10 mL容量瓶，混匀后吸取l.OOmL用水1 ： 1 稀释后过0.22 gm尼龙滤膜，液相色谱测定。

　　1.4色谱条件

　　色谱柱：Shim-pack XR-ODS HI（2 mm><75 mm, 1.6 pm）；流速：0.5 mL/min；进样量5 gL,柱温40 °C；流动相A： 0.1%甲酸乙腊溶液，流动相B： 0.1%甲酸水溶液；洗脱程序（A） : 0 ~ 1 min, 5% 升至 95%, 4.5 min 维持 95%； 7.0 min 降至70%维持至8 min；检测波长：280 nm；检测器釆集频率：100 ms；外标法定量。

　　2结果与分析

　　2.1洗脱程序优化

　　本文釆用的超高效液相色谱法测定茶叶中儿茶素类和咖啡碱，色谱峰较窄，为获得较高的重复性，设定的紫外检测器检测频率为100 ms,进样量5 hL,以保证的每个峰的釆集点数多于20个，且峰较窄，更有利于分离；乙腊和甲醇相比较，乙睛能有效的降低柱压，得到更窄的色谱峰，响应强度更高，有利于提升检测灵敏度，能较好的分离7种化合物，分析时间小于8 mm,色谱图如图1所示。

　　2.2标准曲线及定量限

　　按照确定的样品预处理方法和液相检测条件，依次测定浓度 10.0 mg/L> 20.0 mg/L> 50.0 mg/L、80.00 mg/L 和 100.0 mg/L,混合标准系列工作溶液，得到线性回归方程，线性关系良好。以20 mg/L浓度的混标标准品溶液进行液相分析，以各目标峰的信噪比（SIN 2 3）分别确认7种儿茶素的检出限，如表1表示。