□ 王勇 张志勇 贵州省食品药品检验所

□ 张炯怡 宋晓宁 贵州省食品检验检测院

□ 张金娟 贵州医科大学

摘 要：本研究通过检测白及清肺养胃口服液的急性毒性，为进一步研究及安全使用该产品提供了试验依据。采用一次性给予小鼠灌胃未稀释的白及清肺养胃口服液浸膏样品，记录14天内小鼠出现的死亡及反应情况，根据结果测定白及清肺养胃口服液对小鼠经口给药的半数致死量(Median lethal dose，LD50)或最大耐受量(Maximal tolerance dose，MTD)，亦或最大给药量(Maximal feasible dose，MFD)。结果显示，对小鼠以最大给药容积与最大浓度一次性灌胃白及清肺养胃口服液后，14天内受试小鼠均未出现死亡及其他异常，是以只能测定其最大给药量为200g/kg。故得出结论，以最大剂量给小鼠灌胃白及清肺养胃口服液浸膏后，所有小鼠均未出现死亡及其他异常，提示该受试样品无毒性，且白及清肺养胃口服液对小鼠经口给药的最大给药量为200g/kg。

关键词：白及清肺养胃口服液 急性毒性 小鼠 经口给药

随着人口老龄化进程的加快，我国已进入慢性病的高负担期。由于慢性病具有患病人数多、医疗成本高、患病时间长、服务需求大等特点，故疾病负担是群众因病致贫、返贫的重要原因，若不及时控制将带来严重的社会经济问题，如慢性阻塞性肺疾病(COPD)、慢性胃炎等均属于高发的慢性疾病。白及清肺养胃口服液是为改善肺部及胃肠道疾病而研发的一款纯天然保健食品，本研究对该口服液的急性毒性进行了研究，旨在为该产品的进一步研究及临床安全使用提供试验依据。

1 材料

1.1 受试样品

白及清肺养胃口服液未稀释浸膏(浅棕色膏状物)，按生药量计该浸膏的浓度为500g/L，由贵州医科大学李永军老师课题组提供，批号：20201019。

1.2 试验动物

昆明种(KM种)小鼠，清洁级，体重18~22g，雌雄数量各半，购于长沙市天勤生物技术有限公司，动物合格证号：SCXK(湘)2014-0011。小鼠分笼饲养，每笼5只，由专人管理。动物室光照充足，通风和空调设备良好，实验室环境温度为18~25℃，相对湿度为50%~70%，实验室按常规方式定期消毒。小鼠在该环境饲养3天后，用于实验。给药前禁食(不禁水)12h，给药后自由进食、饮水。

1.3 仪器

精密电子称，AB104-S型，METTLER TOLEDO公司。

2 方法

2.1 预实验

正式试验前先进行预试验——将尚未稀释的白及清肺养胃口服液浸膏抽入注射器后正好通过12号灌胃针头，故此为浸膏的原浓度能够实现给药的最大浓度。预实验采用这一未稀释的白及清肺养胃口服液浸膏进行给药，该浓度按生药量计为500g/L。

取KM种小鼠4只，雌雄各半，体重20~22g，禁食(不禁水)12h。给小鼠灌胃浓度为500g/L(按生药量计)的白及清肺养胃口服液原浸膏0.8mL/只，以摸索白及清肺养胃口服液浸膏的致死剂量。结果显示，4只小鼠均未出现死亡。另取KM种小鼠6只，雌雄各半，体重18~20g，禁食(不禁水)12h后，严格按40mL/kg体重给小鼠灌胃浓度为500g/L的白及清肺养胃口服液浸膏。结果显示，所有小鼠给药后均未出现死亡及其它异常反应情况，是以无法测定白及清肺养胃口服液对小鼠经口给药的半数致死量(LD50)及最大耐受量。因此，正式试验直接测定白及清肺养胃口服液对小鼠经口给药的最大给药量。

2.2 正式试验

正式试验前，取KM种小鼠，雌雄各半，适应性饲养3天后进行正式试验。分组给药前，将小鼠禁食(不禁水)12h，筛选出体重为18~20g的小鼠40只，随机分成两组——对照组和白及清肺养胃口服液组，每组20只。对照组小鼠灌胃蒸馏水，白及清肺养胃口服液组小鼠灌胃浓度为500g/L的白及清肺养胃口服液原浸膏，所有小鼠均按40mL/kg体重的给药体积一次性灌胃给药，给药后观察两组小鼠14天内出现的死亡及反应情况。若有小鼠死亡，立即对其进行解剖，并对心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、肾上腺及胃肠道进行肉眼病理观察。14天后，腹腔注射戊巴比妥钠溶液40mg/kg麻醉小鼠，脱颈椎处死。对各组小鼠进行大体解剖，取其脑、垂体、肺、气管、支气管、胸腺、心、主动脉、肝、脾、肾、肾上腺、输尿管、膀胱、胃肠道、子宫等各器官进行肉眼观察，并对重要器官(心、肝、脾、肺、肾、及脑)进行称重，根据各器官重量按下列公式计算各器官指数。

3 结果

对照组小鼠与白及清肺养胃口服液组小鼠给药后14天内均未出现死亡及其他明显异常——表现为呼吸平稳，活动自如，皮肤红润、无溃烂，被毛有光泽，无蓬松、竖毛现象，眼耳口鼻无异常分泌物，无突眼、瞳孔扩大或缩小，耳廓无充血或苍白等。同时，进食、饮水、大小便均未见异常。与对照组相比，白及清肺养胃口服液组小鼠的体重增长均无明显差异(P>0.05)，见表1。14天后，处死给药组及对照组小鼠，肉眼观察所有小鼠的脑、垂体、肺、气管、支气管、胸腺、心、主动脉、肝、脾、肾、肾上腺、输尿管、膀胱、胃肠道、子宫等器官组织时，均未见两组小鼠各组织器官在体积、颜色及质地等各方面存在异常。与对照组比较，白及清肺养胃口服液组小鼠的心、肝、脾、肺、脑及双肾重量及器官指数均无明显差异(P>0.05)，见表2。

白及清肺养胃口服液组小鼠按实验中能实现的最大剂量给小鼠灌胃白及清肺养胃口服液浸膏，给药后小鼠未出现死亡，也未出现其他异常。实验中能实现的最高给药浓度为500g/L，最大给药体积为40mL/kg，故可折算出本次实验所测定的白及清肺养胃口服液对小鼠经口给药的最大给药量为200g/kg。

4 讨论

急性毒性(Acute toxicity)是指药物在单次或24小时内多次给予后一定时间内所产生的毒性反应[1，2]。进行药物急性毒性试验，对初步阐明药物的毒性作用与了解其毒性靶器官具有重要意义。急性毒性试验中，通常可根据药物特点测定药物的半数致死量、最大耐受量或最大给药量。其中，半数致死量是指预期引起50%动物死亡的剂量;最大耐受量是指动物能够耐受而不引起动物死亡的最高剂量;最大给药量指动物单次或24小时内多次(2~3次)给药所采用的最大给药量[3]。半数致死量的观察指标是动物死亡率，测定最大耐受量时需要观察动物出现的异常表现。本实验中，小鼠能够接受的最大给药体积为40mL/kg;未稀释的白及清肺养胃口服液浸膏的浓度为500g/L时，正好能够通过12号灌胃针头，若高于该浓度，药物便会堵塞灌胃针头而无法实现给药，故该浓度为能实现给药的最高浓度。本研究的预实验中，将最大浓度(500g/L)的白及清肺养胃口服液浸膏按最大给药容积(40mL/kg)给小鼠灌胃，所有小鼠均未出现死亡及其他异常反应，从而无法测定其半数致死量和最大耐受量，所以正式实验时只能测定白及清肺养胃口服液的最大给药量。在进行最大给药量测定时，一次性给予小鼠灌胃最大浓度和最大体积的白及清肺养胃口服液浸膏，结果发现，给药后14天内未发现小鼠死亡或其他异常表现。因此，测定到白及清肺养胃口服液单次经口给药的小鼠最大剂量为200g/kg。

5 小结

综上所述，白及清肺养胃口服液对小鼠进行灌胃给药后，即使按照能够实现的最大给药剂量给药，小鼠仍然没有出现死亡及其他异常反应，表示该受试样品无明显毒性，测定的白及清肺养胃口服液单次经口给药的小鼠最大给药量为200g/kg。

参考文献：

[1] CDER, FDA. Guidance for industry: single dose acute toxicity testing for pharmaceuticals (Final).1996.

[2] CHMP，EMA.Questions and answers on the withdrawal of the “Note for guidance on single dose toxicity”.2010.

[3] 《药物单次给药毒性研究技术指导原则》课题研究组.药物单次给药毒性研究技术指导原则，国家食品药品监督管理局颁布，2014:5-7.

基金项目：贵州省科技厅科技支撑项目(黔科合[2016]支撑2856)。

作者简介：王勇(1985-)，男，博士，副高，主要从事植物化学和药物分析研究。