HPLC法测定市售炮制辅料醋中川芎嗪的含量

2021-05-24 11:35:01 来源：食品安全导刊

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　　HPLC法测定市售炮制辅料醋中川芎嗪的含量

　　本文目的为测定不同品种市售炮制辅料醋中川芎嗪的含量。方法采用HPLC法测定市售醋中川芎嗪的含量，色谱条件为流动相为甲醇-1%HAC（35：65），流速1.0mL·min-1，检测波长280nm，进样量20µL。结果川芎嗪在0.29300µg·mL-1范围内线性关系良好,回归方程为Y=59.18X+127.16(r=0.9998)，平均回收率为98.08%，RSD值为1.56%（n=6）。结论本研究建立的方法操作简便、准确性好、灵敏度高,适用于市售炮制辅料醋的质量控制。

　　食醋中氨基酸的种类多达18种，具有促进胃液分泌，降低血脂和胆固醇，延缓衰老等功能 [1]。近年来，炮制辅料用醋缺少严格的药用标准，有文献测定[2]食醋中苯乳酸的含量，为炮制辅料醋的质量控制提供了依据，还有文献[3]用HPLC的方法测定了镇江香醋中的川芎嗪，认为川芎嗪主要是由微生物的发酵而产生的，美拉德反应是川芎嗪含量增加的主要原因。但是，川芎嗪能否作为炮制辅料醋的质量控制指标未见报道。所以，本实验采用HPLC法测定13种市售炮制辅料醋中川芎嗪的含量，结合酿造原料和工艺分析结果，为炮制辅料用醋品种的选择和药用标准的建立提供依据。

　　仪器与材料

　　Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）； KQ-250E型医用超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）；MS105DU型十万分之一电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；高速冷冻离心机（上海市浦东新区新金桥路27号7号楼），pH试纸（天津市金达化学试剂有限公司）。川芎嗪对照品（批号：110817-200305，中国药品生物制品检定所），其余试剂均为分析纯。13种市售炮制辅料醋：山西紫林陈醋（批号：20200531）；紫林原酿陈醋（批号：20200629）；山西溢勺香老陈醋（批号：20150318）；恒顺镇江香醋（批号：20110928）；海天香醋（批号：20200705）；水塔老陈醋（批号：20200310）；恒顺镇江香醋（批号：20200415）；山西西堡泉老陈醋（批号：20130510）；居易米醋（批号：20200616）；正堂食醋（批号：20200227）；德馨斋清香米醋（20190610）；好太太香醋王（20200703）；海天白米醋（20200617）

　　方法与结果

　　对照品溶液的制备取川芎嗪对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为300µg·mL-1的对照品溶液。

　　供试品溶液的制备精密量取食醋15mL，用10%的NaOH溶液调pH10-11，加入CHCL3 20mL，混匀萃取，静置分层。7200r·min-1离心15min，转移CHCL3，重复上述操作一次，合并CHCL3相。将CHCL3水浴60℃蒸干，残渣用0.2moL·L-1的盐酸和甲醇以3：7比例混合均匀的溶液定容至1mL，临用前用0.45µm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

　　HPLC色谱条件采用Inertsil ODS-3C18色谱柱（250×4.6mm，5µm），流动相为甲醇-1%HAC（35：65），流速1.0 mL·min-1，检测波长280nm，进样量20µL，柱温30 ℃。在该色谱条件下，川芎嗪色谱峰图形较好，见图1。

　　方法学考察

　　线性关系的考察分别精密量取川芎嗪标准品溶液（300µg·mL-1）0.010、0.039、0.156、0.625、2.500mL，置10mL棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取以上稀释的溶液各20µL，进行检测，记录峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为 Y=59.18X+127.16(r=0.9998)，川芎嗪在0.29300µg·mL-1有良好的线性关系。

　　精密度实验取同一供试品溶液，连续检测6次，记录峰面积，计算峰面积的RSD为2.58%，表明仪器精密度良好。

　　稳定性实验取同一供试品溶液，按2.3项下的色谱条件分别在0、2、4、8、16、24 h进行测定，川芎嗪峰面积的RSD为2.46%，说明供试品溶液在24h内稳定性良好。

　　重复性实验取同一供试品溶液6份，按2.3项下的色谱条件进行测定，结果川芎嗪的含量的RSD为1.86%，说明该方法重复性良好。

　　加样回收率实验精密吸取已知含量为9.31µg·mL-1 ，恒顺镇江香醋7.5mL（批号：20200415），共6份，加入川芎嗪对照品溶液适量，按2.2项下制备供试品溶液，2.3项下色谱条件测定，测得的回收率为98.08%，RSD为1.56%，该方法回收率高，符合含量测定的要求。

　　样品测定取2.2项下供试品溶液，按2.3项下的HPLC色谱条件依次进行测定，计算样品中川芎嗪的含量，见表2

　　讨论

　　本文用HPLC法测定13批市售炮制辅料醋中川芎嗪的含量，发现不同方法酿制的辅料醋中川芎嗪的含量也不同。德馨斋白醋、海天白米醋采用液态发酵技术，均未检测到川芎嗪，这与酿造过程中的脱色[4]有关，脱色过程中选择活性炭作为吸附剂，活性炭对极性基团的吸附能力较强，凡是分子中含有极性基团的物质都容易被活性炭吸附，川芎嗪可能在脱色过程被吸附除去。因此，白醋及白米醋不适合作为中药炮制的辅料醋。批号为20110928的恒顺镇江香醋和批号为20200415的恒顺镇江香醋生产原料均为糯米、麦麸、大米、大曲，川芎嗪的含量相差较大，这与陈放过程中的美德拉反应有关，随着醋存放时间的增长，川芎嗪的含量会持续增加[3]。米醋主要有固态发酵和液态发酵两种发酵方式，而液态发酵法周期较短(大约7d)，而固态发酵法生产周期比较长(大约30d)，更利于多种微生物及酶的参与，所发酵醋的风味口感更好[5]。因此，固态发酵的食醋更适宜作为中药炮制的辅料。综上，不同食醋中川芎嗪的含量不同，炮制辅料醋的发酵方法、存放时间等都可对川芎嗪的含量产生影响，可考虑将川芎嗪作为醋的质量控制指标，下一步可进行同一品种不同批次食醋间川芎嗪含量的稳定性试验。

　　参考文献：

　　[1] 吴晓明，曹岚.我国食醋行业发展现状及趋势[J].中国调味品,2012,37(09):19-21.

　　[2] 吴仁蔚，陈亨业，郭俊陆，等.食醋中苯乳酸的提取、鉴定及含量比较[J].中国酿造,2020,39(01):66-70.

　　[3] 李丹亚，许泓瑜，陆震鸣，等.镇江香醋在陈放过程中功能因子的变化规律研究[J].食品工业科技,2008(07):219-221.

　　[4] 曹宝忠,苏迎会，许新军，等.发酵白醋生产及脱色技术探讨[J].中国酿造,2010(04):138-141.

　　[5] 胡本高．液态深层发酵与固态发酵食醋风味差别探讨[J].食品工业,2004(5):27－28．

　　基金项目:国家中医药管理局全国中医药创新骨干人才培训项目（国中医药人教函[2019]128号）；山东中医药大学大学生研究训练计划(SRT)项目(2020050)

　　作者简介

　　董月梅，女，从事药物分析工作。

　　*通信作者，张超

　　董月梅姜其宝田金凤宋晓张超*

　　山东中医药大学药学院山东济南 250355