测试片方法快速检测活性乳酸菌饮料中的乳酸菌总数

2020-04-27 15:37:24 来源：食品安全导刊

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　　测试片方法快速检测活性乳酸菌饮料中的乳酸菌总数

　　作者简介：霍建伟（1983-），男，工程师，从事食品微生物检测及食品安全质量控制工作。

　　摘要：国标乳酸菌检测方法中，对于仅含乳杆菌类的检测，需要3天的时间，且需要在厌氧环境中培养，3M乳酸菌测试片方法，测试片自带厌氧环境，可在正常有氧环境下培养，检测时间2天，提高检测效率，本文针对活性乳酸菌饮料（仅含乳杆菌类）在乳酸菌检测时，对2种方法进行了一致性比较，为企业更好的应用该产品提供有效数据。

　　关键词：测试片方法，乳酸菌检测，提高效率

　　0引言

　　活性乳酸菌饮料(仅包含乳杆菌类)含有大量的乳酸菌，一般出厂时乳酸菌含量大于107 CFU/ml, 目前国标的检测方法是GB 4789.35-2016乳酸菌检测，对于乳杆菌类的检测，需要厌氧培养，72小时出具结果，企业多数采用的是厌氧罐加厌氧袋加厌氧指示剂的方式，为厌氧培养提供条件。

　　3M 乳酸菌测试片是一种即用型培养基系统，测试片含有氧气清除的成分，使其能够自带厌氧环境，可直接在培养箱中培养，无需厌氧罐等辅助设备，且可以在48小时出具结果。

　　本文对2种方法进行比较，通过大量实验数据表明2种方法的一致性，并且3M 乳酸菌测试片方法能提高效率和快速出具检测结果。

　　1 实验

　　1.1材料、试剂和仪器

　　活性乳酸菌饮料（仅包含乳杆菌类)，市场购买。

　　恒温培养箱：36 ℃±1 ℃；天平：感量为0.1 g；均质器；无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头；无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL；无菌培养皿：直径90 mm； 3MTM PetrifilmTM乳酸菌测试片；厌氧罐；厌氧剂；厌氧指示剂，MRS琼脂培养基。

　　1.2方法：

　　1.2.1 样品的处理

　　样品应先将其充分摇匀后，以无菌吸管吸取样品25 mL 放入装有225 mL生理盐水（提前灭菌）的无菌锥形瓶中，充分振摇，制成1:10 的样品匀液。用1 mL微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于装有9 mL 生理盐水的无菌试管中，制成1:100 的样品匀液。按上述操作顺序，依次稀释至10-6，10-7，10-8。

　　1.2.2 GB 4789.35-2016乳酸菌检验方法

　　GB 4789.35-2016乳酸菌检验中6.2.3.4 乳杆菌计数要求，根据待检样品活菌总数的估计,选10-7，10-8适宜稀释度,每个稀释度吸取1mL样液到平皿内,每个稀释度做两个平皿。稀释液移入平皿后,将冷却至48 ℃的MRS琼脂培养基，倾注入平皿约15mL,转动平皿使混合均匀。36℃±1℃厌氧培养72h±2h。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。

　　1.2.3 3M乳酸菌测试片方法

　　将上述对应稀释度的样品，吸取1mL，揭开测试片上层膜，垂直加到测试片中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生，切勿使上层膜直接落下，将压板放置在上层膜中央处，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转或滑动压板，拿起压板，静置至少1min以使培养基凝固，每个稀释度做两个测试片。将测试片的透明面朝上置于培养箱内，堆叠片数不超过20片，36℃±1℃下需氧培养48h±2h。

　　2实验结果与分析

　　2.1实验结果见表1

　　2.2结果分析

　　2.2.1 Log差值分析方法：

　　统计2种检测结果Log值差值的平均值，经计算两种方法的log差值平均值的绝对值为0.08，小于0.50，表明本次实验中3M乳酸菌测试片方法和GB4789.35-2016方法有很好的一致性。（见表2）

　　2.2.2 配对t检验分析方法

　　以上检测结果的配对t检验，P值是0.075，P值大于0.05，表明本次实验中3M乳酸菌测试片方法和GB4789.35-2016方法的结果没有统计学上的差异。

　　2.2.3结论

　　本次实验表明，针对活性乳酸菌饮料（仅含乳杆菌类）的乳酸菌检测，3M乳酸菌测试片方法和GB4789.35-2016乳酸菌检测方法,无显著性差异，一致性很好。

　　测试片方法操作简单，自带厌氧环境，无需厌氧罐和厌氧试剂等设备及耗材，提高了检测效率，检测时间为48h，相比传统GB方法，能在更短时间内获得样品的检测结果。

　　参考文献：

　　[1] GB 4789.35-2016 《食品安全国家标准食品微生物检验乳酸菌检验》

　　[2]SN/T 2775-2011 《商品化食品检测试剂盒评价方法》

　　[3]ISO 16140-2：2016 Microbiology of the food chain – Method validation –Part 2: Protocol for the validation of alternative(proprietary) methods against a reference method

　　[4]AOAC 041701 3MTM PetrifilmTM Lactic Acid Bacteria Count Plate

　　霍建伟

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