二极管阵列检测器在食品检测中的应用探讨

2018-12-26 11:59:43 来源：食品安全导刊

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　　摘要：目的：通过HPLC法对食品添加剂苯甲酸、山梨酸的检验，探讨二极管阵列检测器在食品营养学中的应用范围。方法：采用Agilent C18（150*4.6mm，5µm）色谱柱，用SPD-M20A二极管阵列检测器检验，检测波长：230nm。以甲醇-乙酸铵溶液（5:95）为流动相，柱温25.0℃，流速1.00mL/min。结果：疑似峰为苯甲酸峰，且在225nm处有最大吸收。结论：二极管阵列检测器能够准确甄别目标峰，在食品检验领域具有重要的应用价值。

　　关键词：食品检测；二极管阵列检测器；苯甲酸；甄别

　　适量的食品添加剂为防腐或者加工工艺所需，并且还能够赋予食品色、香、味。超量使用食品添加剂会损害消费者的身体机能，合理膳食不但要关注营养组成，更要关注食品中的添加剂是否过量。大多数食品成分复杂，待检物质为微量甚至痕量，如果在食品前处理过程中处理不当，极易造成分析过程中，杂质成分对待测物质的干扰。本实验采用HPLC法，运用二极管阵列检测器对疑似出现的苯甲酸峰进行了确定，对熟肉中可能含有的食品添加剂苯甲酸、山梨酸两种成分同时进行含量测定。

　　仪器与试药

　　仪器LC-20AT型高效液相色谱仪（日本岛津，包括SPD-M20A检测器，LCSolution工作站）；KT-250W型超声波清洗器（济宁科特超声电子有限责任公司）；AB104-N型电子天平（梅特勒--托尼多仪器(上海)有限公司）；TG16-WS型高速台式离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）

　　试药苯甲酸标准溶液（GBW(E)100006，批号：11003，1.00mg/mL）和山梨酸标准溶液（GBW(E)100007，批号：12001，1.00mg/mL）均购自中国计量科学研究院；甲醇（色谱纯）；水（超纯水）；其余均为分析纯。

　　方法与结果

　　色谱条件色谱柱：Agilent C18柱，150*4.6mm，5µm；流动相：甲醇-乙酸铵溶液（5:95）；柱温：25.0℃；流速：1.00mL/min；检测波长：230nm。

　　对照品溶液的制备分别取苯甲酸、山梨酸标准溶液适量，用水将其稀释成苯甲酸、山梨酸含量分别为0.00mg/mL、0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.08 mg/mL、0.16mg/mL、0.32mg/mL的混合标准使用液。

　　样品溶液的制备称取粉碎均匀样品（卤猪耳，本地餐馆）于小烧杯中，用20mL水分数次清洗小烧杯，将样品移入25mL容量瓶中，超声振荡提取10min，取出后加2mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液，摇匀，用水定容至刻度。移入离心管中，4000r/min离心5min，吸出上清液，用微孔滤膜（0.45µm，水相）过滤，即得。

　　标准曲线的制作将梯度浓度的标准混合使用液精密进样10µL，分别以苯甲酸和山梨酸浓度为横坐标，以响应的峰面积为纵坐标，计算得苯甲酸线性回归方程:Y=4749431303.52X(R2=1)，山梨酸线性回归方程:Y=7081586158.65X(R2=1)。范围内线性关系良好。0.02mg/mL浓度色谱图见图1。

图1 标准品HPLC色谱图

　　精密度试验将0.02mg/mL的混合标准溶液连续进样5次，每次10µL，测定，结果苯甲酸峰面积相对标准偏差RSD=0.28%，山梨酸峰面积相对标准偏差RSD=0.36%，表明仪器精密度良好。

　　最低检出限将0.02mg/mL的混合标准溶液稀释后测定，在信噪比为3时测得苯甲酸检出限为2ng。

　　目标峰的确定分别取供试液及0.02mg/mL的混合标准溶液，进样10µL，用二极管阵列检测器进行全波段扫描，扫描结果见图2。

图2 混合标准溶液扫描图谱

　　样品的含量测定精密称取样品2份，按“2.3”项下方法制备供试液，每份供试液分别进样2次，进样10µL,将数据代入相应标准曲线，测定结果见表1，分析图谱见图4。

表1 熟肉中苯甲酸、山梨酸的含量测定结果

图4 供试液HPLC色谱图

　　讨论

　　超声提取时间的优化本实验对超声的时间进行了优选，试验中对样品超声处理5、10、15分钟的提取效果进行了考察，结果超声5分钟提取不完全，而超声10分钟和15分钟结果相差不大，因此在样品前处理过程中，超声处理10分钟最佳。

　　目标物质的甄别食品检验过程中，在定位峰的保留时间附近，经常会出现其它的峰，难以判定究竟是杂质峰还是待测物质峰。试验中通过标准溶液定位可知苯甲酸保留时间5.527min，而供试品溶液在5.573min有峰出现，鉴于保留时间有细微差别，难以通过HPLC色谱图确定待测物质是否存在。本试验运用二极管阵列检测器的全波段扫描功能，在180nm至800nm范围内，分别对标准溶液5.527min出峰物质和供试品溶液5.573min出峰物质进行扫描，结果显示两者在波段范围内吸收趋势一致，并且均在225nm处有最大吸收，表明两者同为苯甲酸。

　　检测波长的选择国家标准（食品卫生检验方法理化部分㈠）推荐苯甲酸的检测波长为230nm。通过二极管阵列全波段扫描发现，苯甲酸在225nm处有最大吸收，食品检验过程中，是否应该根据实际情况选择最佳吸收波长进行检测，尚需更深入的研究。

　　参考文献

　　［1］中华人民共和国国家标准食品卫生检验方法理化部分㈠［S］.2012年版.253-254

　　吕文超李佳文