气相色谱质谱法检测鸡蛋中五氯酚酸钠残留

2018-08-29 11:07:17 来源：食品安全导刊

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　　五氯苯酚（PCP）是一种有毒农药，常用于木材防腐、杀真菌、杀虫等。我国曾大量将五氯酚酸钠（PCP-Na）用于杀灭钉螺。同时五氯酚酸钠也为触杀型灭生性除草剂，主要用于防除稗草和其他多种由种子萌发的幼草。

　　五氯酚酸钠可由呼吸道、消化道以及皮肤进入人体，在酸性条件下转化为五氯苯酚，微量的五氯苯酚即可导致人体中枢神经系统、肝、肾损伤及内分泌紊乱。《动物性食品中兽药最高残留限量》规定：五氯酚酸钠禁止使用于食品中。

　　鸡蛋作为一种营养价值高，蛋白质含量丰富的食品，深受人们的喜爱。蛋黄主要由卵黄磷蛋白组成，脂肪含量高，其中脂肪主要为卵磷脂，磷脂具有非常好亲水性。国标GB 29708的前处理方法无法有效除去鸡蛋中的磷脂，使试样中含有大量脂肪，不仅降低了目标物的提取效率，还极易污染检测设备，给五氯酚酸钠的检测带来了较大困难。

　　材料与方法

　　试剂与仪器

　　五氯酚酸钠标准溶液100µg/mL（曼哈格）；甲醇（迪马公司，色谱纯）；衍生试剂（乙酸酐：吡啶=1：1）；0.2mol/L碳酸钾水溶液；5%三氯乙酸水溶液；浓盐酸；浓硫酸。

　　实验室用水都为超纯水。

　　Agilent 7890B-Agilent 7000C气质联用仪（配置EI源）；Millipore超纯水机；西格玛高速离心机；漩涡混合器；分析天平（感量0.1mg）；恒温干燥箱；氮吹仪；50mLPPOC高速离心管。

　　方法

　　标准溶液的配制

　　精密吸取五氯酚酸钠标准溶液0.1mL，于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为1μg/mL的五氯酚酸钠标准储备液，-20℃以下保存。

　　取适量的1μg/mL五氯酚酸钠标准储备液，用水配制成浓度为10、20、40、60、80、100ng/mL标准系列工作液。

　　样品液的制备

　　准确称取混合均匀的试样2.00g于50mL具塞离心管中，加入5%三氯乙酸溶液（3.9）10mL、浓盐酸0.5mL和正己烷10mL，高速涡旋提取1min，8000r/min离心5min，收集有机层于50mL离心管中。再用20 mL正己烷分2次洗涤残渣，合并有机层，再向有机相中加入浓硫酸0.5mL，小心振摇，静置2min，8000r/min离心5min，收集上清液，于45℃氮气吹至近干。残余物中加入正己烷1.0mL，加入乙酸酐-吡啶溶液0.2mL，密封，于60℃反应15min，冷却，加碳酸钾溶液0.5mL，充分混匀，静置分层，取有机相，供气相色谱质谱仪测定。同时用空白样品做空白实验。

　　实验条件

　　色谱柱：HP-5MS（30m×0.25mm×0.25μm）；

　　升温程序：60℃保持1min，以15℃/min升温到280℃保持10分钟。

　　进样方式：不分流进样；

　　不分流时间：0.75min；

　　进样量：1μL；

　　进样口温度：260℃

　　载气：氦气（99.999%）；

　　恒流模式：1mL/min；

　　离子源温度：280℃；

　　传输线温度：280℃；

　　扫描模式：选择离子检测，检测离子（m/z）：266（定量），308，237，165，130。

　　结果与讨论

　　实验原理

　　GB 29708-2013使用水提取试样中的五氯酚酸钠，三氯乙酸脱蛋白。五氯酚酸钠在酸性条件下转化为五氯苯酚，使用乙酸乙酯-环己烷（1︰1）提取五氯苯酚，后经衍生，生成五氯苯乙酸酯（PCP-OAc），使用气质联用仪测定PCP-OAc的含量，来获得五氯酚酸钠的含量。

　　鸡蛋中除丰富的蛋白质外，卵黄中还含有大量的磷脂，磷脂具有较好的亲水性和脂溶性，无法使用GB 29708的前处理方法除去。而五氯苯酚在脂肪中的溶解度较大，要保证检测的灵敏度和准确度，就必然带入大量的磷脂，过量的磷脂将严重影响衍生效果和污染检测设备。本方法直接使用正己烷提取，简化了提取操作。在衍生前，通过加入浓硫酸来脱去脂肪，排除磷脂产生的不良影响，提高了检测效率，保证了灵敏度和准确度。该方法也可用于其他脂肪含量高的样品中五氯酚酸钠的测定。

　　标准曲线

　　分别取浓度为10、20、40、60、80、100ng/mL的标准工作液1.0mL，置于50mL离心管中，以下操作步骤同样品溶液的制备。以特征离子质量色谱图峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。标准物质色谱图质谱图见图1，标准曲线见图2。

　　图1 PCP-Oac的色谱图（上）和质谱图（下）

　　图2标准曲线

　　回收率和精密度实验

　　鸡蛋的称样量为2.00g，添加浓度为5µg/kg，20µg/kg，50µg/kg三个水平，各做三个平行样，标准物质、样品加标和样品图谱见图4，测定结果和精密度见表1。

　　图3样品图谱（自上而下依次为标准溶液、样品加标、空白样品）

　　表1加标回收率和精密度

　　由图3可见，净化效果良好，且对检测没有干扰。本方法在鸡蛋中的加标浓度为5µg/kg时，回收率为109%，重复性RSD为3.6%；加标浓度为20µg/kg时，回收率为109%，重复性RSD为2.9%；加标浓度为50µg/kg时，回收率为113%，重复性RSD为4.1%，以上数据表明该方法检测鸡蛋中的五氯酚酸钠稳定可靠。方法检出限以3倍信噪比计算得到，本方法测定鸡蛋中五氯酚酸钠的检出限为0.5µg/kg。

　　图4样品加标量为5µg/kg的提取离子流图

　　结论

　　鸡蛋中的五氯酚酸钠在酸性条件下，经正己烷提取，浓硫酸脱脂，衍生后经气质联用仪测定确认，外标法定量。结果表明：本法五氯酚酸钠的回收率为106.1%-118.4%，平行测定结果的RSD值≤5%，方法检出限为0.5µg/kg，能够满足鸡蛋中五氯酚酸钠残留量的检测要求。同时该方法也拓展到其他脂肪含量高的样品中五氯酚酸钠的测定。

　　□何旭峰黄小兰易良键肖琦龙超

　　重庆市万州食品药品检验所

　　作者简介：何旭峰，男，助理工程师。