关键词：调味品；玫瑰红B；方法优化

 

　　现状及危害

 

　　玫瑰红B又称罗丹明B、碱性玫瑰精,俗称花粉红,是一种鲜桃红色的人工合成染料。经老鼠试验发现,罗丹明B会引起皮下组织生肉瘤,被怀疑是致癌物。卫生部《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》第一批中禁止玫瑰红B(罗丹明B)用作调味品着色。但为了获得好的卖相,玫瑰红B(罗丹明B)的滥用现象依旧存在于食品领域,但调味品中玫瑰红B(罗丹明B)的检测目前没有国家标准,只有针对进出口食品的SN/T 2430-2010《进出口食品中罗丹明B的检测方法》,该标准采用乙酸乙酯/正己烷=1：1提取,GPC净化,耗时长、成本高、回收率最高只能达到70%,且容易交叉污染。

 

　　目前检测方法探索

 

　　关于玫瑰红B(罗丹明B)的检测方法,目前国内外主要集中在检测方法的选择、提取试剂的选择、净化方法的选择、本底分析判定、快速检测试剂盒的研究等方面。检测方法集中在薄层色谱法、液相色谱紫外检测法、液相色谱荧光检测法、液相色谱质谱联用法,提取试剂有传统的乙酸乙酯/环己烷体系,还有创新改进的乙腈、酸化乙腈、乙醇/水、乙醇一氨水等,净化方法除凝胶外,多集中在固相萃取,如C18、MCX、PCX固相萃取等,固相萃取可以得到比较干净的待测液,但步骤相对繁琐。

 

　　实验室方法优化

 

　　优化说明

 

　　针对目前玫瑰红B检验的这些问题,实验室在原标准方法的基础上，优化了检验方法，改变了提取试剂和净化方法，提取试剂采用价格便宜的甲醇溶液，净化方法采用quechers方法配备的净化管（150mgMgSO4、50mgPSA、50mgC18混合）净化，大大节省了成本、提高了效率。

 

　　液质联用采用C18柱，甲醇/0.1%甲酸水作为流动相梯度淋洗可得到干扰较少的峰。经检验，实验室方法最高回收率达到99.5%，在0.5ng/mL~50ng/mL范围内，相关系数为0.995，重现性良好。阳性样品对比，未折回收率时，优化方法的结果比采用SN/T 2430-2010、GB/T23496-2009和地方标准的高，折完回收率二者结果相当，证明甲醇做作为提取剂可充分提取所测物质，而MgSO4/PSA/C18作为净化剂在净化的基础上对物质的回收影响不大，可采用这种提取和净化方法。

 

　　对甲醇提取时间和提取次数的优化探索实验见表1，通过回收率的计算，最终选定10mL甲醇超声1h，提取1次。

 

　　表1不同提取条件下玫瑰红B的回收率

 

　　甲醇用量提取次数超声时间回收率

 

　　5mL甲醇/定容到15mL 1 20min 62.6%

 

　　每次5mL甲醇/定容到15mL 2每次20min 82.8%

 

　　每次5mL甲醇/定容到15mL 3每次20min 95.1%

 

　　10mL甲醇1 1h 99.5%

 

　　实验步骤

 

　　提取

 

　　称取1.00g样品（精确至0.01g）于50mL离心管中，准确加入10mL甲醇（3.1），于旋涡混匀器上混合提取1min，再超声提取60min后，于4000r/min离心5min，取上清液1mL于净化管中（3.3）净化后，离心，过0.22μm微孔滤膜后进液相色谱-质谱仪。

 

　　测定

 

　　液相色谱-质谱/质谱条件

 

　　a）色谱柱：C18柱，2.1mm（内径）×100mm，1.7μm，或相当者；

 

　　b）流动相：乙腈——0.1％甲酸，梯度洗脱程序见表2；

 

　　表2流动相梯度洗脱程序

 

　　0 5 95

 

　　0.30 5 95

 

　　1.00 80 20

 

　　2.90 80 20

 

　　3.00 5 95

 

　　5.50 5 95

 

　　c）流速：0.30mL/min；

 

　　d）柱温：40℃；

 

　　e）进样量：5μL；

 

　　f）离子源：电喷雾离子源；

 

　　g）扫描方式：正离子；

 

　　h）检测方式：多反应监测（MRM）；

 

　　i）质谱/质谱图见图1

 

　　结果分析

 

　　本实验室通过对150批次辣椒粉、50批次火锅底料、3批次调味酱的检测结果显示，基质对本方法的影响不大，能保证较高的回收率，经净化管净化，可得到较干净的待测液，回收率高，重现性好，测定低限均为0.005mg/kg，可用于调味品中玫瑰红B的检验。

 

　　参考文献：

 

　　[1]陈勇,花锦,潘亚利,等.超高效液相色谱-电

 

　　喷雾串联质谱法同时测定调味品与熟肉制品中6

 

　　种工业染料[J].中国调味品,2014(4):124-127.

 

　　[2]范文锐,吴青,劳扬,等.高效液相色谱

 

　　法同时测定食品中7种非食用色素[J].分析化

 

　　学,2012,40(2):292-297.

 

　　□朱辉陶相锦王鲁霞菏泽市食品药品检验检测研究院

 

　　作者简介：朱辉，女，汉，山东省泰安市，高级工程师，硕士，研究方向：食品检验检测。