乙酸酐和三乙胺组合衍生在水产品中氯霉素测定的应用

2017-10-24 11:23:48 来源：食品安全导刊

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　　氯霉素广泛应用于动物传染性疾病的治疗，曾在水产养殖业中得到广泛的应用，但同时也带来了严重的残留问题，氯霉素能够抑制人体骨髓造血功能，引起贫血等。因此对水产品中的氯霉素的检测具有特殊意义。

　　国内外文献报道氯霉素类药物的检测方法主要采用气相色谱法、气相色谱-质谱联用法和液相色谱-质谱联用法。气相色谱-质谱联用法和液相色谱-质谱联用法灵敏度高，但价格昂贵，一般基层实验室不配备这样的仪器，因此不适合于基层实验室大量检测市场上水产品中氯霉素的含量。气相色谱仪价格便宜，适合于我们日常生活中水产品中氯霉素的检测。国内外检测氯霉素的常用方法大多数与国家标准SC/T 3018-2004方法类似，利用N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）/三甲基氯硅烷（TMSCl）作为衍生剂,吡啶作为催化剂。但BSTFA对环境的湿度很敏感，需要严格控制反应条件，并且衍生后的氮-硅键和氧-硅键在气相色谱的加热环境下有可能分解，影响测定和实验重现性。吡啶是一个具有恶臭的有毒气体，应用吡啶作为催化剂具有二次污染和对实验人员造成危害。

　　针对现有技术的不足，我们研发了一种新的氯霉素测定方法。

　　实验部分材料、试剂、仪器：检测的样品为鱼、虾和蟹。甲醇、正己烷、乙腈；乙酸乙酯。气相色谱仪；旋转蒸发仪；电子天平；旋涡混合器；毛细管气相色谱柱RTX-5ms。氯霉素标准品来自于德国Dr.Ehrenstorfer标准品公司，纯度≥99%。

　　方法气相色谱的条件为：采用RTX-5ms作为固定相的毛细管柱，所述毛细管柱的柱长为30m、内径为0.25mm、膜厚度为0.25μm；柱温为程序升温，初始温度150℃，保持1min，以15℃/min的速率升温至260℃，保持10min，再以30℃/min的速率升温至280℃，保持5min；总运行时间为24min；载气为氦气，纯度≥99.99%；采用恒流模式，线速度为31.1cm/s；进样口温度为260℃，不分离进样；检测器为63Ni电子捕获检测器。

　　样品处理样品预处理：取待测水产品，取肌肉部分，称取5g置于离心管中，加入20mL乙酸乙酯，均质机均质1min，4000r/min离心3min，得到的混合液转移到细口鸡心瓶中；再向离心管加入10mL乙酸乙酯，均质1min,4000r/min离心3min，合并乙酸乙酯提取液，于40℃水浴中减压旋转蒸发近干。

　　样品净化：向鸡心瓶中加入1mL甲醇旋涡混合溶解经样品预处理处理的样品残留物，再加入15mL正己烷和25mL4%氯化钠溶液，振荡混合1min后转移到离心管中，4000r/min下离心2min，弃去上层正己烷相；再向水相中加入10mL正己烷，振荡、离心后弃去正己烷相；向所述水相中加入15mL乙酸乙酯，旋涡混合2min，3000r/min离心3min，吸取乙酸乙酯层，经过无水硫酸钠柱脱水过滤于50mL鸡心瓶中；再向水相中加入5mL乙酸乙酯，旋涡混合、离心后吸取乙酸乙酯层，经无水硫酸钠柱脱水过滤；用少量乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱，合并提取液，40℃水浴中减压旋转蒸发近干。

　　样品及标准品的衍生化样品的衍生化：往旋转蒸发近干的提取物中加入2mL乙酸乙酯溶解并转移到离心管中，再用1-2mL乙酸乙酯洗涤提取物，合并乙酸乙酯，加入300μl乙酸酐和300μl的三乙胺，用乙酸乙酯定容到5mL后旋涡2min，得到样品溶液，供气相色谱分析备用；标准品的衍生化：取适量标准品于离心管中，加入300μl乙酸酐和300μl的三乙胺，用乙酸乙酯定容到5mL后旋涡2min，得到标准品溶液，供气相色谱分析备用。

　　气相色谱检测分别吸取衍生后的标准品溶液和样品溶液，注入气相色谱仪中进行测定。

　　结果与讨论取衍生后的氯霉素标准品溶液进行检测，结果见图1。从图1可以看出，标准品的色谱图峰形尖锐、对称，与邻近峰完全分离。