关键词：酱油;黄曲霉毒素B1;免疫亲和柱;荧光检测器;光化学衍生

　　试剂和溶液 除非另有规定，所用水为蒸馏水或去离子水;乙腈(色谱纯);乙腈-水溶液(8+2)：取80ml乙腈加20ml水;氯化钠(分析纯)吐温-20(分析纯);黄曲霉毒素B1标准溶液(3ug/ml),保存于4℃备用;黄曲霉毒素B1系列标准工作液：准确移取适量的黄曲霉毒素B1标准溶液，用甲醇稀释成系列的标准工作液。

　　仪器和设备 高速均质机(最高转速≥10,000r/min)或摇床;黄曲霉毒素B1免疫亲和柱;玻璃纤维滤纸;空气压力泵;0.22um微孔滤膜;高效液相色谱仪：具有365nm激发波长和460nm发射波长的荧光检测器;UVE光化学柱后衍生器;色谱柱：C18柱(柱长250mm,内径4.6mm，填料直径5um)。1 提取:称取5g±0.01g样品加入1g氯化钠与25ml提取液(80%乙腈-水溶液)涡旋5min混匀;然后高速均质(≥10,000r/min)1min,或摇床(200r/min～300r/min)剧烈振荡20min后再3500r/min离心10min;取10ml上清液加入40ml蒸馏水稀释，在用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液。取25ml上样液过免疫亲和柱净化。2 净化:将免疫亲和柱连接于20ml或50ml注射器下,并于气控操作架相连接，将上述的提取液注入注射器中，调节气泵开关，使液体以1～2滴/秒的速度流出，待液体排干后，用10ml去离子水洗涤2次，流速2～3滴/秒;对于颜色附着比较深的样品，先用1%吐温-20水溶液洗涤10ml,再用去离子水洗涤10ml, 流速2～3滴/秒;待离子水排完后，用气泵将残留的水抽干;再用2ml甲醇进行洗脱，前1ml甲醇加入免疫亲和柱后，盖上小盖保持5分钟，然后以流速1滴/秒洗脱，待流完后再加入后1ml甲醇以流速1滴/秒洗脱，最后用气泵抽干，合并2次洗脱液;洗脱液用0.22um微孔滤膜过滤后上机待测。

　　测定 1 高效液相色谱条件:流动相：水/甲醇/乙腈(55/30/15,v/v)、流速：1.2ml/min、进样量：10～100ul、柱温：36℃、色谱柱：C18柱(柱长250mm,内径4.6mm，填料直径5um)、荧光检测器：具有365nm激发波长和460nm发射波长(使用柱后光化学衍生系统)。2 定量:用进样器吸取样品洗脱液和黄曲霉毒素B1系列标准工作液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液和样品洗脱液的响应值(峰高或峰面积)，绘制标准曲线，用外标法定量。3 空白试验 ：除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。4 结果计算: 样中黄曲霉毒素B1的含量(X)以微克每千克表示，按下式计算：

　　式中：X—试样中黄曲霉毒素B1的含量，单位微克每千克(ug/kg);C1—由标准曲线查得的样液中黄曲霉毒素B1的含量，ng;C0—由标准曲线查得试剂空白中黄曲霉毒素B1的含量，ng;V—样液最终定容体积，mL;V1—样液的进样体积，uL;f—稀释倍数;m—样品质量g

　　4.线性：B1含量在0.003ng～0.048ng范围内，标准曲线线性在0.9998以上。

　　线性数据表

　　级别 含量(ng) 响应 相关线性

　　1 0.003 83811.5

　　2 0.006 159609.9

　　3 0.012 302316.4

　　4 0.024 608834.5

　　5 0.048 1184756.0

　　5.回收率：回收率在105～116之间

　　酱油及加标测定数据(本底都为未检出)

　　编号 加标量(ng) 检出值(ng) 加标回收率 编号 加标量(ng) 检出值(ng) 加标回收率

　　1 3.0 3.1515 105 4 12.0 12.9011 108

　　2 3.0 3.2044 107 5 12.0 13.5021 113

　　3 3.0 3.2911 110 6 12.0 13.9071 116

　　该方法线性好、回收率高，而且检测过程简便快捷，比起GB/T 5009.23，该方法省时省力检测的准确度更高，适用于检测酱油中黄曲霉毒素B1的含量。

　　参考文献：《食品中黄曲霉素B1、B2、G1、G2的测定》GB/T 5009.23-2006

　　安徽省淮南市食品药品检验中心 秦加松