经过查阅中外文献发现，现如今提取花青素的原料一般为胡柚、浆果等水果类食物，而较少采用常见的蔬菜紫皮洋葱来进行实验。此外，目前所使用的常规提取方法仍较为传统，而这些方法普遍存在着一些弊端。反之，新型的微波辅助提取法(MAE)具有提取充分、得率高、耗时短等优点，从而渐渐受到广泛重视，其原理为在微波辐射下，样品中的水分等极性物质吸收微波能量，大量产热，使得细胞内温度升高迅速，当液态水汽化时产生巨大的压力将细胞膜和细胞壁冲破，从而有利于胞内物质释放到提取液中并充分溶解。

　　综合上述情况，本实验选取紫皮洋葱作为原料，使用MAE进行辅助提取，并采用析因设计法来确定最为优化的提取条件，同时尝试对高效液相色谱(HPLC)的洗脱梯度进行优化，为后续对紫皮洋葱中花青素的定性和定量实验做好铺垫。

　　实验材料和方法 样品准备 从超市购买2公斤紫皮洋葱，洗净后切成小块(5mmX5mmX2mm)装入密封袋中，暂时无需使用的样品可储存于冰箱内的冷冻层中(-18℃)。样品前处理 用水、乙醇和甲酸(体积比为94:5:1)混合的提取液对切好的样品(洋葱皮：洋葱球茎=1:4)进行提取。

　　MEA实验方法(1)经查阅文献，选取三个参数作为本实验中的变量，即微波功率(w，瓦)，提取时间(min，分钟)和固液比(样品体积：提取液体积);

　　(2)变量选择好后，先预估本实验中三个参数的范围，然后进行预实验，以确定微波仪器所能承受的功率和实验容器所能承载的样品体积;(3)考虑到参数彼此间的相互作用，为确定MAE的最优提取条件，对实验中的三个变量进行析因设计，并进行8组实验。HPLC检测方法 紫皮洋葱中含有多种花青素的衍生物，而这些成分在HPLC中的保留值不同，因此在本实验中应用反相HPLC结合梯度洗脱法，来对紫皮洋葱中的多种花青素衍生物进行分离，并对洗脱梯度进行优化，最后进行重复性和再现性实验。

　　色谱条件 色谱柱：C-18(2.5μm，2.0mmX100mm)。流动相：A为5%的甲酸水溶液;B为5%的甲醇水溶液。检测波长：520nm。流速：0.2ml/min。柱温：30℃。经0.45μm的滤膜过滤后，进样量30μL进行色谱分析。

　　实验结果 通过MAE预实验，确定微波仪器的最大功率应<300w，实验容器所能承载的样品体积应<10mL，以防止实验样品的外溢和降解。通过完全析因设计的8组实验，可以从提取液的颜色中推断出较合理的参数组合，然后再绘制等值线图对实验结果进行进一步的分析，确定MAE的最优条件为微波功率50w，固液比1:40，提取时间3分钟。通过对不同洗脱梯度下色谱图的分析对比，权衡其出峰时间和峰型效果，对洗脱梯度进行优化(见表1)，其中包含了前10分钟的平衡时间和后20分钟的冲洗时间。

　　表1 花青素的优化洗脱梯度

　　选择优化梯度下的一个洗脱较快(15-16分钟之间)且形状良好的峰，进行三次平行实验，对每一次的该峰面积进行计算，结果其相对标准偏差(RSD)为2.38%，表明重复性和再现性良好。

　　吕冠薇 长春医学高等专科学校