铜绿假单胞菌也称绿脓杆菌，是一种常见的条件致病菌。铜绿假单胞菌在自然界分布广泛，存在于空气、土壤、水体、动物和人皮肤、呼吸道及肠道中。铜绿假单胞菌能够产生溶于水的绿脓菌素、荧光色素、红脓菌素，同时该菌还能够产生内毒素、胞外毒素、外毒素A等十余种致病因子，其中外毒素A为重要的致死因子。在食品检测领域，铜绿假单胞菌是一种非常重要的水源性致病菌，其广泛存在于水源水及各类型包装饮用水中。近年来，随着包装饮用水生产和消费量的不断上升，铜绿假单胞菌污染包装饮用水的报道逐渐增多，甚至引起食物中毒。现阶段，包装饮用水中铜绿假单胞菌污染的问题日益受到重视，包装饮用水中的铜绿假单胞菌已经成为各级监管部门和检测机构重点监测的对象。包装饮用水新国标GB19298-2014于2015年5月24号正式实施，新国标修改了微生物指标与限量，铜绿假单胞菌被列为必检的微生物检测项目之一。为了掌握新国标实施以来贵州省内生产和销售的包装饮用水中铜绿假单胞菌污染的情况，本文共检测了291个批次的包装饮用水，结果分析如下。

　　材料与方法(一)样品来源 包装饮用水新国标GB19298-2014于2015年5月24日开始实施，所以此次检测和统计的水样为2015年5月24日至2015年12月31日抽检的样品。检测样品由专业抽样人员在贵州省内各包装饮用水生产企业和供水站进行随机抽样，共抽取了291个批次的包装饮用水。各个批次的包装饮用水均在有效期内进行检测。(二)试剂与仪器CN琼脂(货号：027254)、金氏B培养基(货号：027052)购自广东环凯微生物科技有限公司。乙酰胺肉汤(货号：HB8653)、纳氏试剂(货号：HB8654)、氧化酶试纸(货号：HB2100)购自青岛海博生物技术有限公司。0.45μm滤膜(货号：HAWG047S6)和过滤仪器购自密理博中国有限公司。三用紫外分析仪购自上海汉诺仪器有限公司。(三)检测方法及评价严格按照国标GB/T8538 4.54-2008进行铜绿假单胞菌的检测。采用滤膜法进行铜绿假单胞菌的检测，将250ml水样用0.45μm孔径的滤膜进行过滤，然后将滤膜移至CN琼脂平板上，于36℃±1℃恒温培养箱中培养40-48h。在培养20-24h和40-48h后观察滤膜上菌落的生长情况：①滤膜上所有显绿色或蓝色的菌落，直接判定为铜绿假单胞菌并计数;②在长波紫外灯(365nm)下检查滤膜，能够产生荧光的非绿/蓝菌落为疑似铜绿假单胞菌，进行乙酰胺肉汤产胺试验，产胺试验实验阳性判定为铜绿假单胞菌;③滤膜上不发荧光的红褐色菌落进行乙酰胺肉汤产胺试验、氧化酶实验、金氏B产荧光实验，如上述三项实验均为阳性，则判定为铜绿假单胞菌[7]。实验过程中使用铜绿假单胞菌阳性标准菌株(CMCC:10104)作为对照。检测结果按照GB19298、DBS52/008等相关标准进行卫生学评价。

　　结果(一)不同类型包装饮用水中铜绿假单胞菌检出情况本次共检测291个批次的包装饮用水，检出铜绿假单胞菌阳性样品9个批次，检出率为3.09%，检出范围为2-51 CFU/250ml。天热饮用山泉水为215个批次，检出铜绿假单胞菌阳性样品7个批次，检出率为3.24%，检出范围为2-51 CFU/250ml。饮用纯净水为75个批次，检出铜绿假单胞菌阳性样品2个批次，检出率为2.67%，检出范围为4-32 CFU/250ml。天然饮用山泉水与饮用纯净水铜绿假单胞菌检出率无显著性差异(χ2=0.02，P>0.05)(见表1)。

　　表1 不同类型包装饮用水中铜绿假单胞菌检出情况

　　样品

　　批次 铜绿假单胞菌指标 检出率 检出范围

　　合格 不合格 (%) (CFU/250ml)

　　天然饮用

　　山泉水 216 209 7 3.24 2-51

　　饮用纯净水 75 73 2 2.67 4-32

　　合计 291 282 9 3.09 2-51

　　(二)不同包装类型饮用水中铜绿假单胞菌检出情况

　　瓶装饮用水共26个批次，未检出铜绿假单胞菌阳性样品。桶装饮用水共265个批次，检出铜绿假单胞菌阳性样品9个批次，检出率为3.40%，检出范围为2-51 CFU/250ml。瓶装饮用水与桶装饮用水铜绿假单胞菌检出率无显著性差异(χ2=0.91，P>0.05)(见表2)。

　　表2 不同包装类型饮用水中铜绿假单胞菌检出情况

　　样品

　　批次 铜绿假单胞菌指标 检出率 检出范围

　　合格 不合格 (%) (CFU/250ml)

　　瓶装饮用水 26 26 0 0.00 0

　　桶装饮用水 265 256 9 3.40 2-51

　　合计 291 282 9 3.09 2-51

　　包装饮用水是密封于符合食品安全标准和相关规定的包装容器中,可供直接饮用的水[6]。本文共检测了291个批次的包装饮用水，检出铜绿假单胞菌阳性样品9个批次，检出率为3.09%，说明目前贵州省内生产和销售的包装饮用水存在铜绿假单胞菌污染问题，应引起市场监管、食品药品监督管理局等相关部门的重视。

　　本次检测中铜绿假单胞菌检出率为3.09%，低于其他地区的检出率。王燕梅等的调查报告中显示在江苏省7个省辖市中，铜绿假单胞菌的检出率为10.3%(34/331)。陈松等的文章中显示四川达州市铜绿假单胞菌的检出率为52.17%(12/23)[。魏磊等的抽样检测结果显示山泉水成品水中铜绿假单胞菌的检出率为5.6%。

　　本次检测结果显示贵州省内生产和销售的包装饮用水存在铜绿假单胞菌污染问题。从以往的研究结果来看，铜绿假单胞菌污染包装饮用水的主要原因有：一是生产用水源被铜绿假单胞菌污染，魏磊、邓梅清等的调查显示生产用水源水的铜绿假单胞菌检出率显著高于成品水的检出率;二是水处理和灌装过程中引起的铜绿假单胞菌污染，不科学的水处理方式、反冲洗操作不当、未彻底消毒的生产环境和生产设备等都有可能引起铜绿假单胞菌对成品水的污染;三是包装材料的选择与清洗消毒不当会引起铜绿假单胞菌的污染。

　　随着经济与社会的发展，包装饮用水的消费量逐年增长，为了保障包装饮用水的卫生质量，降低包装饮用水铜绿假单胞菌污染风险，保护消费者的切身利益，生产企业应对水源进行科学的保护和管理，选择科学的水处理方式，科学合理地对生产环境、生产设备、包装材料进行清洗消毒;监管部门应加强对生产企业的监督和抽查力度，督促包装饮用水生产企业严格按照国家标准进行生产、运输和贮存，切实保障包装饮用水的质量和卫生安全。

　　第一作者及通讯作者：

　　姓名：罗绍楠 男，布依族，硕士研究生，贵州省产品质量监督检验院工作，助理工程师，研究方向：食品微生物检测。

　　其他作者：戴奕杰、刘廷菊、肖莉：工作单位：贵州省产品质量监督检验院。