《食品安全导刊》刊号:CN11-5478/R 国际:ISSN1674-0270

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食用油中黄曲霉毒素的测定

2016-01-05 10:42:58 来源:

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利用SepLine全自动固相萃取仪
测定食用油中的黄曲霉毒素
 
北京莱伯泰科仪器股份有限公司/康锐
 
前言:
黄曲霉毒素对人和动物健康具有极大的危害,其中以黄曲霉毒素B1毒性最大,属特剧毒的毒物范围。引起人的中毒主要是损害肝脏,发生肝炎肝硬化,肝坏死等,急性中毒严重者会出现水肿昏迷,以至抽搐而死。黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质,主要诱使动物发生肝癌,也能诱发胃癌、肾癌、直肠癌及乳腺、卵巢、小肠等部位的癌症。
本文建立了SepLine-S4全自动固相萃取仪测定食用油中的黄曲霉毒素B1的方法。系统的密闭性及溶剂回收功能,可保护操作人员免受有毒有害物质的危害。同时降低了实验室工作量,提高了工作效率,保证结果的平行性和准确性,具有较高的回收率。

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  1. 实验部分:
1.1仪器与试剂
SepLine-S4 全自动固相萃取仪(莱伯泰科有限公司,美国);
ACQUITY UPLC 超高效液相色谱仪,配备荧光(FLR)检测器 (沃特世,美国);
黄曲霉毒素B1标准溶液,浓度2.0μg/ml,溶于苯-乙腈(98:2)溶液;
甲醇(色谱纯),超纯水;
Aflatoxin B1 Columns (1ml) 免疫亲和柱(Beacon,美国)。
1.2标准物质的处理
1.2.1标准储备液:移取1.5ml黄曲霉毒素B1标准溶液,用甲醇定容在10ml容量瓶中,配置成300ng/ml的标准储备液,于4℃冰箱中避光保存。
1.2.2标准使用液:移取标准储备液0.2ml,用甲醇-水(1:1)溶液定容在10mL容量瓶中,配置成6ng/ml的标准使用液,现配现用。
 
 
1.3 样品的处理
1.3.1样品的提取
选取市售的菜籽油,香油各一份。另有已知含黄曲霉毒素B1的花生油一份(含量已知)。
称取5g食用油于50ml离心管中,加入25ml甲醇-水(7:3)溶液,涡旋震荡约1min,待震荡均匀后超声提取10min。将提取液通过滤纸过滤,吸取5ml滤液至SepLine进样瓶,再加入10ml的水,混合均匀等待净化上样。
1.3.2加标样品的提取
同样称取1.3.1中选用的菜籽油及香油5g,向离心管中加入1ml黄曲霉毒素B1的标准使用液(加标标准为1.2ng/g),之后的提取过程与1.3.1完全一致。
1.3.3样品的净化
将Aflatoxin B1免疫亲和柱的两端盖子去掉,倾倒出里面的保护液,放入SepLine萃取柱架中。注意随用随放,不可提前倒掉保护液使柱子干掉。
固相萃取方法编辑如下:
步骤 溶剂 体积(ml) 流速(ml/min) 干燥时间(sec) 是否收集
上样 Sample 12.0 1.0 0.0 N
淋洗 甲醇-水(3:7) 2.0 1.0 0.0 N
淋洗 10.0 1.0 30.0 N
洗脱 甲醇 1.0 1.0 10.0 Y
洗脱 1.0 1.0 60.0 Y
经SepLine固相萃取仪净化后的样品,再经过滤膜过滤,待检测。
1.4 UPLC检测条件
色谱柱:C18 (250mm×4.6mm,5μm);
柱温:35℃;
流动相:甲醇-水(1:1)
流速:0.5ml/min;
FLR检测器激发波长:360nm;发射波长:440nm;
进样量:5μL。
 
  1. 结果与讨论
2.1 黄曲霉毒素B1标准使用液(6ng/ml)的液相色谱图
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2.2菜籽油样品色谱图
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                             未检出
 
2.3菜籽油加标样品色谱图
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2.4香油样品色谱图
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                             未检出

2.5香油加标样品色谱图
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206已知黄曲霉毒素B1含量的花生油样品色谱图
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2.7计算菜籽油和香油样品的加标回收率及相对偏差,回收率均在86.88%~102.08%之间,RSD均在5%以下,具体见下表:
样品 黄曲霉毒素B1的加标回收率(%) 标准偏差
平均
菜籽油 97.91 102.08 95.21 98.40  3.52%
香油 95.00 86.88 90.21 90.70  4.50%
 
已知黄曲霉毒素B1含量的花生油检测结果为:
样品 黄曲霉毒素B1的浓度(ng/g) 已知含量(ng/g) 偏差
平均
花生油 22.74 23.17 22.82 22.91 23.00 0.39%
 
结论:
本方法采用SepLine全自动固相萃取仪,利用Aflatoxin B1免疫亲和柱对菜籽油、香油及花生油进行提取净化,采用配备荧光检测器的UPLC检测黄曲霉毒素B1,平均回收率达到90%以上,RSD均小于5%。实验过程自动化程度高,平行性好,结果数据理想,且能最大限度的保护操作人员免受有毒有害物质的危害,能够完全满足食用油中黄曲霉毒素的检测要求。
 
参考文献:
  1. GB/T 18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法
  2. GB 5009.24-2010 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定
  3. GB/T 5009.23-2006 食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定
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