摘 要：本研究采用分光光度法，以芦丁为对照品，乙醇回流提取平卧菊三七茎中总黄酮。通过对提取温度、提取时间、乙醇浓度和料液比进行单因素及正交试验。结果表明，最佳提取工艺条件：提取时间3h、料液比1g：30mL、温度80℃、乙醇浓度90%，此时黄酮得率为4.243%。

　　关键词：平卧菊三七 茎 黄酮 提取 得率

　　平卧菊三七(Gynura procumbens (Lour.) Merr)为菊科三七属植物，别名蛇接骨、树三七、石三七等。是一种攀援草本，茎匍匐，呈淡褐色或紫色，且有条棱。我国的平卧菊三七多产于广东、海南、贵州、云南[1]，近年来，江西省也开始大面积种植。平卧菊三七是一种药食两用的植物，也是十分具有开发潜力的食品和保健品新资源。平卧菊三七有诸多生理活性，如抗氧化、抑菌、降低三高等[2-6]，被认为“全身都是宝”，其根和茎更是中成药上佳的原材料。研究表明，其茎枝的活性成分主要有：黄酮类、三萜苷元类、甾醇类化合物以及香草醛、丁香醛、对羟基苯甲酸、对羟基桂皮酸、原儿茶酸等酚酸类化合物[7]。但是，对于其茎中活性物质的提取还未曾见报道。因此，为提高其综合利用价值，本研究以平卧菊三七的嫩茎为材料，采用单因素和正交试验对其中总黄酮的提取工艺进行了研究及优化，以期为平卧菊三七的综合利用及产品的开发提供参考依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料与试剂

　　平卧菊三七嫩茎，产自江西省。采摘时其嫩度以人的指甲能够掐断为宜，采后去掉叶片及其他杂物，经晒干粉碎后，冷藏待用;芦丁标准品，购自天津市福晨化学试剂厂;其余试剂均为分析纯。

　　1.2 主要试验仪器

　　UV-2100型可见光分光分度计，尤尼柯(上海)仪器有限公司;Adventurer AR2140电子天平，OHAUS CORP USA;HH-4数显恒温水浴锅，国华电器有限公司。

　　1.3 试验方法

　　1.3.1 平卧菊三七茎的预处理

　　将待用的平卧菊三七茎粉过40目筛后，再用石油醚脱色脱脂3h，然后放入通风橱中风干至恒重，得到样品。

　　1.3.2 平卧菊三七茎中总黄酮提取工艺流程

　　平卧菊三七茎→预处理→乙醇溶液加热回流提取→过滤→定容→测吸光度→计算黄酮得率。

　　1.3.3 芦丁标准曲线的制作[8]

　　精密称取于120°C干燥至恒重的芦丁标准品10mg，加80%乙醇溶解，定容至25mL容量瓶中，摇匀。准确吸取标准品溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL，各加入干燥的10mL容

　　量瓶中，加5%的NaNO2溶液0.3mL，放置6min后，加10%的Al(No3)3溶液0.3mL，放置6min再加4%的NaOH溶液4mL，加水至刻度，摇匀，放置15min，分别在510nm处测定其吸光度。以溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线(见图1)，并确定回归方程：y=0.0089x-0.0001,R2=0.9922。

　　1.3.4 平卧菊三七茎中总黄酮提取方法设计[9]

　　以乙醇溶液为溶剂，采用加热回流提取法，根据试验条件按照一定的提取时间、提取温度、料液比、乙醇浓度进行单因素试验，并在单因素试验的基础上进行L9(34)正交试验以优化。通过比色法检测平卧菊三七茎中总黄酮的含量。

　　1.3.5 提取液黄酮浓度的测定和黄酮得率的计算

　　准确称取10g平卧菊三七茎粉末置于回流烧瓶中，加入适当体积分数的乙醇溶液适量，置于水浴锅中，在一定温度下回流提取一定时间，过滤后准确吸取滤液1mL，置于10mL容量瓶中，之后按照标准曲线的操作方法进行，测定吸光度后确定总黄酮浓度，进而计算出提取液中总黄酮的质量。并按下式计算黄酮得率：

　　1.3.6 验证试验

　　为确定最佳提取条件的重复性及稳定性，在最佳条件下重复3次提取试验，并计算总黄酮得率。

　　2 结果与分析

　　2.1 平卧菊三七茎中黄酮提取的

　　单因素试验结果

　　2.1.1 乙醇浓度对黄酮得率的影响

　　由图2可知，当乙醇浓度在50%～90%的范围内，随着乙醇浓度的递增，有利于黄酮类物质的的溶出;当乙醇浓度达到90%时，黄酮得率达到最高水平;随后乙醇浓度继续升高，黄酮得率反而略有下降，这可能是由于物料中的其他醇溶性物质也溶出，这些成分与黄酮类物质有竞争作用，导致黄酮得率下降[10]。因此，总黄酮提取的最佳乙醇浓度为90%。

　　2.1.2 料液比对黄酮得率的影响

 

　　如图3所示，料液比在1∶20～1∶30之间时，随着料液比的增大，黄酮得率是增加的;料液比为1∶30时，黄酮总得率达到最高，以后溶剂量再增大，黄酮得率并未未继续增加，故1∶30为最佳的料液比。

　　2.1.3 提取时间对黄酮得率的影响

　　由图4可以看出，在1～3h内，随着提取时间的延长，黄酮得率逐渐增加;当提取时间为3h时，得率达到最高。若继续延长提取时间，得率反而下降，故选择3h为最佳提取时间。

　　2.1.4 提取温度对黄酮得率的影响

　　图5表明，在80℃之前时，随着温度的升高，黄酮得率逐渐增大，80℃时黄酮的得率达到最高。此后，随着温度的继续升高，得率下降，可能因为黄酮类物质在高温下被氧化破坏，影响了浸提效果。故最佳的提取温度为80℃。

　　2.2 平卧菊三七茎中黄酮提取的正交试验结果

　　综合考虑多因素相互作用对平卧菊三七茎中总黄酮提取得率的影响，并根据单因素试验结果，采用L9(34)正交设计对其茎中总黄酮提取条件进行优化，试验结果见表1。方差分析结果见表2。

　　由表1可知，极差RC>RA>RB>RD，即表明对平卧菊三七茎中黄酮的提取得率的影响大小顺序依次是提取时间、乙醇浓度、料液比、提取温度。在正交实验中得到的最佳提取条件为A2B2C2D2，即提取时间为3h、料液比为1∶30、温度为80℃、乙醇浓度为90%。黄酮平均得率为4.245%。

　　由表2可知：乙醇浓度、料液比、提取时间这三者对平卧菊三七茎中黄酮提取的得率影响极显著，而提取温度对其影响显著。

　　按照正交表中A2、B2、C2、D2的条件进行了验证试验，共做了3个平行，得到总黄酮得率的均值为4.243%，与之前的试验结果吻合良好，说明该工艺条件较为可靠，并具有稳定的再现性。

　　3 结论

　　以平卧菊三七的嫩茎脱脂干燥粉为试验材料，用乙醇回流加热提取法进行提取，通过4个单因素及L9(34)正交试验，得到总黄酮提取的最优工艺条件。从极差分析和方差分析来看，对平卧菊三七茎中总黄酮提取得率的影响主次顺序依次为提取时间、乙醇浓度、料液比、提取温度。最优提取条件为：乙醇浓度90%，料液比为1g：30mL、提取温度为80℃、提取时间3h。在此条件下，平卧菊三七茎中总黄酮的平均得率约为4.243%。

　　参考文献

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　　[2] 郑国栋，帅丽乔娃，黎冬明，等.平卧菊三七提取及抗菌作用的研究[J].食品科技，2014，39(4)：218-221.

　　[3] 闵伶俐，唐源江.菊三七属植物研究进展[J].中药材，2004,8(1)：28～29.

　　[4] Akowuah G A,Chin J H.The effect of extraction temperature on total phenols and antioxidant activity of Gynura procumbens leaf[J].Pharmacognosy Magazine，2009,5 (17)：81-85.

　　[5] 郑国栋，钟树生，张庆峰，等.平卧菊三七对小鼠血糖及血脂的影响[J].现代食品科技，2013，29(12)：2800-2804.

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　　[7] 韩华，闫雪莹，匡海学，等.接骨木的研究进展[J].中医药信息，2008，25(6)：14-16.

　　[8] 郑国栋，林乐珍，黎冬明.微波辅助提取平卧菊三七中总黄酮的工艺研究[J].江苏农业科学，2015，43(8)：279～281.

　　[9] 王钦德，杨坚.食品试验设计与统计分析[M].北京：中国农业大学出版社.2003:102-148;330-336.

　　[10] 查甫本，陈向明.山核桃外果皮黄酮提取条件的研究[J].合肥学院学报，2009，19(3)：68-72.