固相微萃取与高效液相色谱联用测定食品中的苏丹红

2015-06-10 13:37:32 来源：食品安全导刊

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固相微萃取与高效液相色谱联用测定食品中的苏丹红
戴桂梅

　　摘要：采用固相微萃取与高效液相色谱联用测定食品中的苏丹红。实验结果显示：苏丹红的浓度与峰面积之间呈现良好线性，相关系数>0.9990，实际样品加标回收测定中，加标回收率在96%-99%之间，相对标准偏差RSD范围为0.43%-0.82%。该样品前处理方法具有快速、高效、节省溶剂的优点，同时测定结果线性关系良好、回收率高、精密度好，可用于日常测定食品中的苏丹红。

　　关键词：固相微萃取;高效液相色谱;苏丹红

　　苏丹红系列染料是非生物合成亲脂性偶氮化合物，因苏丹红能引起实验动物肝脏、膀胱细胞癌变，对人体健康有害并可能致癌，1995年欧盟国家已禁止其作为食用色素，我国在《食品添加剂使用卫生标准》中也禁止将苏丹红作为食品添加剂使用。苏丹红事件敲响了食品安全的警钟，在检测方面，研究发现现场检测苏丹红方法，开发成本低、操作简单、高效、快速、能重复应用等优点的检测设备是今后研发的方向之一。

　　目前测定苏丹红的前处理方法有固相萃取法、凝胶柱净化法、旋蒸浓缩层析法，固相微萃取法。相比较，固相微萃取法节省溶剂、高效、易与分析仪器联用。

　　本文采用固相微萃取法进行样品前处理建立与高效液相色谱联用快速检测食品中苏丹红，简化样品的前处理，降低成本，缩短仪器检测时间。

　　一、实验部分

　　1.主要仪器。Thermo U3000高效液相色谱仪;Agilent C18色谱柱(250mm，4.6mm，5μm);75μmCarboxen/PDMS固相微萃取头;分析天平：0.1mg;磁力搅拌器

　　2.试剂。苏丹红标准溶液;乙腈;丙酮;甲酸;正己烷

　　3.色谱分析条件。色谱柱：Thermo C18

　　流动相：溶剂A 0.1%甲酸的水溶液：乙腈=85:15

　　溶剂B 0.1%甲酸的乙腈：丙酮=80:20

　　梯度洗脱：流速：1.0mL/min;柱温：30℃波长;苏丹红Ⅰ478nm;苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ520nm，于苏丹红Ⅰ出峰后切换，进样量10μL。梯度条件见表1。

表1 梯度条件

　　4.标准曲线。准确吸取苏丹红标准储备液，配制系列浓度分别为0、0.32、0.64、1.28、2.56、5.12μg/ml的混合标准溶液，根据各组分的响应峰面积与相应的浓度进行线性回归，绘制标准曲线。

　　5.样品测定。加标样品溶液置于一个3 mL萃取瓶中，将75μm Carboxen/PDMS 固相微萃取头插入萃取瓶中，让涂层全部浸入萃取溶液，置于磁力搅拌器上，在一定的搅拌速度下萃取20min。将75μm Carboxen/PDMS 固相微萃取头从样品瓶中取出后，用正己烷溶液解吸15 min，除去75μm Carboxen/PDMS 固相微萃取头表面残留萃取溶液。经滤膜过滤后待测。

　　二、结果与讨论

　　1.线性关系与检出限。苏丹红标准曲线在(0.32-5.12μg/mL)线性范围内，以峰面积y为纵坐标，浓度(μg/mL)为横坐标绘制标准曲线，得到线性方程，回归方程、相关系数R2 =0.9993，浓度与峰面积之间呈现良好线性。

　　以S\N=3时对应的浓度作为检出限，苏丹红四种化合物的检出限均在10μg/L以下。

　　2.实际样品及加标回收测定。采用本方法，对市面出售辣椒粉进行测定，检测结果为未检出。故取辣椒粉进行加标回收实验。称取样品2g(精确到0.0001g)，在样品中添加苏丹红标准溶液即样品加标量为2.56μg/mL。按上述前处理方法，进行三水平测定。精密度和回收率见表2。

表2 加标样品回收率与精密度