□ 徐永威 沃特世科技(上海)有限公司

　　2013年1月，新西兰牛奶及奶制品被检测出含有少量的有毒物质双氰胺，新西兰政府已经下令禁售含有双氰胺的奶类产品。由于中国是新西兰奶制品的出口大国，所以这一敏感的食品安全问题又一次触动了全中国人民的心。沃特世(Waters®)公司基于全新的ACQUITY UPC2技术平台，推出快速而便捷的UPC2-MS检测方案。二氰二氨(俗称双氰胺)，缩写为DICY或DCD，是氰胺的二聚体，也是胍的氰基衍生物。化学式C2H4N4，白色结晶粉末，可溶于水、醇、乙二醇和二甲基甲酰胺，几乎不溶于醚和苯。不可燃，干燥时稳定。

　　双氰胺极性非常大，传统C18色谱柱及HILIC色谱柱均难以保留，对于复杂的奶制品基质来说会与杂质共流出，影响分析目标化合物的定量和定性，这是一个分析难点。UPC2技术，采用超临界CO2和适量的助溶剂为流动相，以正相的分离模式，实现化合物的分离。因此，对于反相LC难以保留的化合物，UPC2能提供很好的保留，并通过简易的梯度优化，即可实现很好的定量分离。

　　实验方法

　　样品前处理方法

　　取1g奶粉加2mL水溶解，然后加乙腈定容至10mL，并沉淀蛋白，12000转高速离心10min;取上清液，经0.22μm滤膜过滤后直接上样分析。

　　仪器方法

　　UPC2方法：

　　仪器：ACQUITY UPC2系统;

　　流动相A：CO2;

　　流动相B：甲醇(2%水);

　　色谱柱：ACQUITY UPC2 BEH 3.0x50mm 1.7µm;

　　流速：2.2mL/min;

　　柱温：50℃;

　　背压：2200psi;

　　进样体积：3µL;

　　梯度曲线：见表1。

　　MS参数：

　　毛细管电压：3.2kv;

　　脱溶剂气温度：450℃;

　　脱溶剂气流速：800L/hr;

　　碰撞气流速：0.2mL/min(参阅表2)。

　　实验结果

　　双氰胺标准曲线(配置1.0、2.0、10.0、50.0、100.0ppb浓度双氰胺加奶粉基质标准溶液，每个点重复进样3针，根据检测结果获得的标准曲线见图1)。

　　结论

　　双氰胺极性非常大，传统C18色谱柱及HILIC色谱柱均难以保留，采用沃特世公司全新推出的ACQUITY UPC2系统，BEH 3.0x50mm 1.7µm色谱柱，对双氰胺有很好的保留，并能快速排除基质的干扰，进行双氰胺的定量分析。采用上述方法进行双氰胺的分析，可大大简化前处理的流程，只需简易的蛋白沉淀法，即可满足定量检测的要求，对于实际的检测工作，能使工作事半功倍。