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□ Edgar Naegele 安捷伦科技有限公司PAHs是由石化产品不充分燃烧产生的，具有致癌潜力，是环境和食品中需要监控的污染物。欧盟835/2011中规定了不同食品中的苯并（a）芘的含量上限。苯并（a）芘是判断是否含有多环芳烃的主要标识物，例如在食用油中其含量不能超过2ppb。
食品中的PAHs分析是耗时耗力的工作。以食用油为例，样品在进行HPLC分析之前，通常需要皂化、萃取、净化等多步处理。而使用在线的色谱柱切换方法，可以减小工作量。该方法基于供体-受体复合物色谱法（DACC），PAHs先被选择性的吸附在DACC色谱柱上，而基质被洗脱，然后再在PAH色谱柱上进行PAHs的分析。
本文证明使用Agilent 1260 Infinity LC系统可以在不进行样品前处理条件下，直接分析食用油中的多环芳烃（PAH）。色谱柱自动切换和高灵敏度的荧光检测器（FLD）使得基体的去除和PAHs的富集分析自动进行。欧洲当局要求检测的主要PAHs，其校正曲线和性能数据将在文中讨论。
实验仪器
Agilent 1260 Infinity二元泵；Agilent 1260 Infinity四元泵；Agilent 1260 Infinity自动进样器；Agilent 1290 Infinity柱温箱，配置Agilent 2位6通阀头；Agilent 1290 Infinity阀驱动，配置Agilent 2位6通阀头；Agilent 1290 Infinity荧光检测器，Agilent OpenLAB CDS ChemStation软件。富集柱：Agilent ChromSpher Pi, 3.0x80mm；分析柱：Agilent ZORBAX Eclipse PAH, 3.0x250mm, 5μm。
HPLC 方法
在油样品进样到富集柱上后（进样量100μL），四元泵抽取异丙醇以0.4mL/min的速度冲洗自动进样器和富集柱10min后，自动进样器切换到旁路位置；换用乙腈/水流动相体系，以1mL/min的流速将富集柱上的异丙醇冲洗掉。在13min时，外置阀切换位置，反冲富集柱，进一步冲洗掉基质。在14min时，柱温箱中的阀切换位置，将富集柱与分析柱相连。在两根色谱柱在被切换到流路之前，分析柱上的流速提升到1mL/min。在22min时，柱温箱中的阀切回原来位置，PAHs在二元泵系统中以乙腈/水梯度条件进行分离。当二元泵在分析PAHs时，四元泵使用高乙腈比例对富集柱进行清洗。在34min时，外置阀切换至初始位置，四元泵输送异丙醇，将富集柱平衡至起始状态，为下一针进样准备。
Supelco PAH校正混合标样，来自德国Sigma-Aldrich公司。含有如下16种化合物：1 Naphtalene萘；2 Acenaphthylene苊烯；3 Acenaphthene苊；4 Fluorene芴；5 Phenanthrene菲；6 Anthracene蒽；7 Fluoranthene荧蒽；8 Pyrene芘；9 Benzo（a）anthracene苯并（a）蒽；10 Chrysene 1，2-苯并菲；11 Benzo（b）fluoranthene苯并（b）荧蒽；12 Benzo（k）fluoranthene苯并（k）荧蒽；13 Benzo（a）pyrene苯并（a）芘；14 Dibenzo（a,h）anthracene二苯并（a,h）蒽；15 Benzo（ghi）perylene苯并（ghi）苝；16 Indeno（1,2,3-cd）pyrene茚并（1,2,3-cd）芘。
PAH校正混合标样浓度为10μg/mL（10ppm），以此为储备溶液，在异丙醇和葵花油中稀释至10,5,2,1,0.5,0.2,0.1ppb，用于建立校正曲线，确定定量限（LOQ），检出限（LOD），准确度和精密度数据。
结果与讨论
该自动化方法可以分离检测校正标样中的化合物5～16。化合物1～4的保留较弱，在使用异丙醇冲洗富集柱的过程中，以及切换到乙腈/水流动相体系时被冲走（图1）。欧洲委员会报告中将荧光检测器的激发波长设置为260nm，用于PAHs的检测。1，2-苯并菲在350nm的发射波长下具有最佳灵敏度和选择性，苯并（a）蒽、苯并（b）荧蒽、苯并（a）芘在440nm的发射波长下最佳（550nm的发射波长用来检测茚并（1,2,3-cd）芘）。
在0.5ppb到10ppb的浓度范围内建立校正曲线，对于1，2-苯并菲、苯并（a）蒽、苯并（b）荧蒽、苯并（a）芘都具有很好的线性。在浓度为0.5ppb和0.2ppb下，分别计算了检出限和定量限。欧盟委员会指导原则中，只对苯并（a）芘的检出限和定量限做了规定，要求其定量限为0.9ppb，检出限为0.3ppb。本应用的数据结果优于该规定，定量限低于0.2ppb，检出限低于0.1ppb。1，2-苯并菲、苯并（a）蒽、苯并（b）荧蒽的检出限分别为0.2ppb、0.01ppb、0.04ppb；定量限分别为0.5ppb、0.31ppb、0.13ppb。
使用浓度为10ppb的标样进样后，再进空白来检查交叉污染。对于1，2-苯并菲没有显着交叉污染，对于苯并（a）蒽、苯并（b）荧蒽、苯并（a）芘，交叉污染约为0.2%。
使用浓度为10ppb的样品多次进样，保留时间的RSD值在0.5%以下，峰面积的RSD值在1%以下。最后使用PAHs浓度为10、5、2ppb的葵花油样品，来检测在基质影响下的精密度和准确度。峰面积精密度RSD值在1%以下，受到基质的影响，准确度为100%～120%。满足规定中对苯并（a）芘80%～20%的要求。
结论
本文证明使用Agilent 1260 Infinity LC系统可以在不进行样品前处理条件下，直接分析食用油中的多环芳烃（PAH）。色谱柱自动切换和高灵敏度的荧光检测器（FLD）使得基体的去除和PAHs的富集分析自动进行。且本方法中苯并（a）芘的定量限（0.2ppb）、检出限（0.1ppb）优于欧盟委员会指导中要求的指标（定量限0.9ppb，检出限0.3ppb）。
食安中国 (责任编辑：yangj)
