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□ AB SCIEX 供稿黄曲霉毒素是生长在食物及饲料中的黄曲霉和寄生曲霉代谢的一组化学结构类似的产物，目前已分离鉴定出的黄曲霉毒素有17种。黄曲霉毒素是一种毒性极强的物质。其危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。我国食品中黄曲霉毒素B1允许量标准（GB 2761-2011）规定，玉米、花生仁、花生油中不得超过20μg/kg，大米、其他食用油中不得超过10μg/kg，其他粮食、豆类、发酵食品中不得超过5μg/kg。
目前，测定食品中的黄曲霉毒素的方法有薄层层析法、液相色谱法、放射免疫分析法、酶联免疫法、免疫层析法、微柱筛选法、金标试纸法等。我国现行使用的国家标准GB/T 5009.24-2011中规定了食品中黄曲霉毒素B1、M1的薄层层析测定方法。本文中将介绍采用Triple QuadTM 5500系统检测黄曲霉毒素M1、M2、G1、G2、B1、B2共6种，并且经实验证实AB SCIEX 4000系列（API 4000+TM、4000 QTRAP?）、API 5000TM、API 5500TM以及5500 QTRAP?同样适用于该方法。
前处理方法
黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2提取（GB 18979-2003）
大米、玉米、小麦、花生及其制品：准确称取经过磨细（粒度小于2mm）的试样25.0g于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠及甲醇一水（7+3）至125.0mL（V1），以均质器高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤，准确移取15.0mL（V2）滤液并加入30.0mL（V3）水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1～2次，至滤液澄清，备用。
植物油脂：准确称取试样25.0g于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠及甲醇-水（7+3）至125.0mL（V1），以均质器高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤，准确移取15.0mL（V2）滤液并加入30.0mL（V3）水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1～2次，至滤液澄清，备用。
黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2净化（GB 18979-2003）
大米、玉米、小麦、花生及其制品、植物油脂：将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确移取15.0mL（V4）样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2～3mL空气通过柱体。以10mL水淋洗柱子两次，弃去全部流出液，并使2～3mL空气通过柱体。准确加入1.0mL（V）色谱级甲醇洗脱，流速为1～2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
实验方法
液相条件
色谱柱：Waters UPLC HSS T3, 2.1X100mm, 1.8μm；
柱温：25℃，流速：300μL/min；
流动相：A：水（含0.1%甲酸），B：50/50乙腈/甲醇；
梯度洗脱，洗脱条件见表1。
质谱条件
离子源：电喷雾源ESI；
扫描模式：多反应监测MRM，正离子模式。
定量质谱数据
化合物保留时间
利用色谱柱梯度洗脱，得到分离效果良好的色谱图（图1），此时6种黄曲霉毒素浓度为5μg/mL。
灵敏度检测数据（基质加标ppb）
通过添加基质测试方法的灵敏度，图2中为浓度0.05μg/mL，定量离子见表2，此时S/N基本为10（按照噪音的3倍标准偏差计算），所以定义该方法除M2最低检测限（LOQ）为0.1μg/mL外，其它化合物LOQ为0.05μg/mL。
重现性数据
以黄曲霉毒素B1、B2、M2为例，列举黄曲霉毒素质谱检测方法的重复性实验数据。在实验结果中可以看到即使信号强度相对较弱的黄曲霉毒素M2在浓度为0.05μg/mL的时候，结果重现性均小于或等于6%，说明该方法对于黄曲霉毒素的检验结果具有检出限低，重复性好的优点。基质加标得到浓度为0.05ppb的样品重复进样11次，得到该浓度下黄曲霉毒素B1的标准偏差（%CV）为6%，满足方法中“在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%”要求。基质加标得到浓度为0.05ppb的样品重复进样11次，得到该浓度下黄曲霉毒素B2的标准偏差（%CV）为4%，满足方法中“在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%”要求。基质加标得到浓度为0.05ppb的样品重复进样11次，得到该浓度下黄曲霉毒素G2的标准偏差（%CV）为5.3%，满足方法中“在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%”要求。
结论
采用Triple Quad 5500系统灵敏度可满足黄曲霉毒素在食品安全法规检测要求，仪器最低定量限除M2为0.1μg/mL外，其它化合物LOQ为0.05μg/mL。在分析复杂基质样品黄曲霉毒素实验中，低浓度水平下同样具有良好的重现性以及准确性。
食安中国 (责任编辑：yangj)
