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□ 吕恒源 杨海军 保龄宝生物股份有限公司
压力蒸汽灭菌器是一种常见的消毒灭菌装置。微生物实验室一般采用这一装置，通过饱和蒸汽对试剂等进行高温灭菌。试剂能否完全灭菌直接关系到微生物试验的成败，以及微生物检测结果是否真实、可靠。通过定期开展的灭菌效果验证，能够确认压力蒸汽灭菌器能否在规定的时间、温度和压力条件下达到设备性能指标，试剂能否被有效灭菌。
材料与方法
设备
立式压力蒸汽灭菌器、生物指示剂培养器、生化培养箱。
耗材
四环牌121℃压力蒸汽灭菌化学指示卡、四环牌ME-压力蒸汽灭菌生物指示剂（嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂管）、试管（18×180mm）、锥形瓶（500mL）、平板计数琼脂。
方法
1.热分布测试
（1）空载热分布
按照每层5个化学指示卡的量，取出相应数量的化学指示卡，做好数字标记，置于敞口试管中，如图所示，置于蒸汽灭菌器标示位置。注意灭菌器中只放置试管，不放置试剂。开启灭菌器，按照标准程序在121℃，15min条件下进行灭菌。灭菌结束后将化学指示卡的验证结果记录于《高压蒸汽灭菌效果验证记录表（年度）》中。
（注：各点按从左到右、从上到下编号1～15）
图1 化学指示卡分布图
（2）满载热分布
在灭菌器内装满锥形瓶（洗后清洁且满装培养基），自下而上摆放。按照每层5个化学指示卡的量取出相应数量的化学指示卡，做好数字标记，置于敞口试管中，如图1所示置于标示位置。开启灭菌器，按照标准程序在121℃，15min条件下进行灭菌。灭菌结束后将化学指示卡的验证结果记录于《高压蒸汽灭菌效果验证记录表》中。
2.性能测试
（1）生物指示剂验证
将一定量的耐热菌放入待灭菌的产品中，在设定的灭菌条件下进行灭菌，以验证设定的灭菌工艺是否确实赋予产品必须的灭菌值。
（2）验证菌选择
嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂管，含量5×105～5×106CFU/片。
（3）使用方法
取嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂管，做好数字标识，放入检测包的中心，按照上图所示均匀分布于灭菌器的各层位置，按照标准程序在121℃，15min条件下进行灭菌。灭菌结束后即刻将生物指示剂管取出，在室温下放置10min左右，然后盖朝上垂直握于手中，用镊子夹住指示管下端尖部，将管内瓿夹碎，让培养液流出，浸没菌片，充分振摇。然后将其置于56℃培养箱内，同时放1支未经灭菌程序处理的生物指示管作为阳性对照，一并培养48h，观察结果并记录于《高压蒸汽灭菌效果验证记录表》中。
（4）灭菌后培养基质量验证
从灭菌后的培养基中取出2瓶或3瓶（从不同的层）分别倒入已灭菌的平皿内，每瓶制备5个平皿。36℃培养48h，记录菌落生长情况于《高压蒸汽灭菌效果验证记录表》中。
3.验证标准
图2 生物指示剂
生物指示剂（如图2）原为紫色。经灭菌后，在56℃条件下培养48h。颜色不发生变化者表示符合灭菌条件；颜色由紫色变为黄色，表示不符合灭菌条件，不能达到灭菌要求。
图3 化学指示卡
灭菌后，如图3所示，左面指示色块达到或深于标准色，表示符合灭菌条件；否则不符合。
结 果
空载热分布试验
从表1可以看出，15个测试点的化学指示卡的指示颜色均由黄色变为黑色，表明15个测试点均达到测试预期要求。空载热分布试验圆满成功。
满载热分布试验
从表2可以看出，15个测试点的化学指示卡的指示颜色均由黄色变为黑色，表明15个测试点均达到测试预期要求。满载热分布试验圆满成功（注：对照指示卡没有进行灭菌）。
生物指示剂验证
从表3可以看出，经过灭菌培养后，15个测试点的生物指示剂的颜色均未发生改变，而未灭菌直接培养的阳性对照管的颜色从紫色变为了黄色，表明15个测试点均达到测试预期要求。生物指示剂测试圆满成功。
灭菌后培养基质量测试
从表4可以看出，经过灭菌培养后，分布于灭菌器3层15个点的培养基均没有菌落生长，说明培养基灭菌完全，达到预期要求。
通过热分布测试和性能测试的结果，可以证明该设备具备很好的灭菌性能，可以正式投入使用。同时，经过此次验证建立了一套完整的蒸汽灭菌设备的验证方案及验证试验方法，为今后灭菌设备的定期验证奠定了良好的基础。
食安中国
(责任编辑：yangj)
