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125I标记单克隆抗体技术
同位素标记是一种重要的抗体标记技术，牨977年Yalow等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺贝尔奖。McAb标记同位素后除应用于放射免疫测定外，还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等。
一 原理
氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠，在水溶液中生成次氯酸，为一种温和氧化剂，当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中，可将I２氧化为I＋并结合到氨基酸上。如标记条件温和，标记后的McAb仍具有良好的结合活性，通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。
二 方法
在细胞冻存管内加入纯化的McAb100μg／100μl，
再加入10μl 0.05M磷酸缓冲液
再加入10μl含1mCi125I
↓
加入10μl氯胺-T5mg／ml溶于0.05M
磷酸盐缓冲液，孵育时间不超过30秒
↓
加入100μl偏重亚硫酸钠1.2mg／ml溶于
0.05M磷酸缓冲液
↓
加入200μl KI溶液少许结晶KI溶于0.05M
磷酸缓冲液＋4％牛血清白蛋白
↓
用PD10柱Sephadex G25除去游离125I
用4％BSA PBS洗脱
↓
分部收集，0.5ml／管
每管取5μl进行γ计数，计算标记抗体的比活性和标记率
结合于McAb１２５I放射性强度cpm
标记率％＝───────────────────
总放射性强度cpm
结合于某一管McAb上的放射性强度
比活性μCi／μgMcAb＝────────────────
某一管McAb总量
三 试剂器材
1. 纯化后的McAb
2. 0.05M磷酸缓冲液，氯胺桾，偏重亚硫酸钠，KI，BSA
3. 125I
4. 有通风装置的超净台，γ计数仪
5. PD10柱Sephadex G25
四 注意事项
1. 严防同位素污染，工作人员必须穿着工作衣，戴口罩、帽子、手套。必须在严密的通风橱或通风超净台中操作。操作前后对实验室环境进行监测。所用125I和标记物应妥善保管。
2. 如标记细胞因子、激素等，应选用更温和的标记方法，使保持更好的生物学活性。
(责任编辑：cuiyc)
