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雷启福 Patrik Appelblad 默克化工技术（上海）有限公司
近日，百事可乐的产品在美国10个州中被爆出4-甲基咪唑（4-Methylimidazole）严重超标。4-甲基咪唑是一种有机中间体，主要用于合成大宗胃药西咪替丁，也可用作环氧树脂固化剂和金属表面防护剂等。可乐中的4-甲基咪唑是在以亚硫酸铵为原料生产焦糖色素时产生的。4-甲基咪唑白色至类白色结晶粉末，易溶于水和乙醇，有腐蚀性，是一种能诱发肿瘤的化学物质。
默克密理博致力于分析方法的开发，为客户提供简便、快速的解决方案。4-甲基咪唑及其异构体2-甲基咪唑均有较强极性，适合使用默克密理博的两性离子型亲水作用色谱柱（ZIC?-HILIC）分离。
本实验采用默克密理博两性离子型（ZIC?-HILIC）色谱柱直接分析可乐中甲基咪唑的液相色谱方法。该方法前处理简单，不需要衍生化，也不需要添加离子对试剂。
材料试剂
对照品：4-甲基咪唑，2-甲基咪唑。
色谱柱：ZIC?-HILIC 250-4.6mm 5μm 200?（默克密理博），乙腈（默克密理博），甲醇（默克密理博），磷酸二氢钾（默克密理博），可口可乐及百事可乐样品，实验为超纯水（默克密理博Milli-Q Advantage），PVDF0.22um针头过滤器（默克密理博）。
标准溶液配制：使用70%乙腈溶液，分别配制1mg/mL的4-甲基咪唑，2-甲基咪唑对照品原液。取两个对照品原液，1∶1混合、稀释、定容得100μg/mL的混合对照品母液。混合母液用70%乙腈溶液配制浓度为0.1～10μg/mL的标准工作液。
样品前处理：取3mL可乐饮料样品于5mL容量瓶中，用碱液调节pH值至11.0，加水稀释至刻度。混匀，取1mL溶液于10mL容量瓶中，加8mL乙腈溶解，超声10min后，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度。混匀，静置，分层，取上层清液，过滤。另取3mL可乐，加入标准品后，调节pH值，再同法处理。
Agilent 1260 HPLC色谱条件
色谱柱：ZIC?-HILIC PEEK250-4.6ｍｍ5μm（1.50458.0001）；
流动相：A-磷酸缓冲盐（20mM K2HPO4），B-乙腈；
梯度程序：0～12min 80%B，12～15 min 80～50%B，15～20min 50%B，Post time 7min；
检测波长：214nm；
柱温：30℃；
流速：1mL/min；
进样体积：20μL。
测试结果
1.对照品测试
混合对照品溶液测试图见图1，结果见表1。
2.校准曲线
配制0.1、0.5、2、5、10μg/mL的对照品溶液，分别进样检测。根据浓度与峰面积值绘制校准曲线。
结果表明，在0.1～10μg/mL之间，线性关系良好，方法检测低限0.02μg/mL。
3.加标回收及精密度试验
百事可乐样品按照样品处理方法处理，结果显示未检出甲基咪唑，且在4-甲基咪唑和2-甲基咪唑色谱峰附近没有干扰峰。见图3。
取3mL百事可乐样品，分别加入不同量混合对照品，经过处理后测定，结果见图4。计算加标回收率，见表2。
4.可口可乐样品测试
取可口可乐，按照方法处理，检测，结果显示未检测到甲基咪唑。测试图谱见图5。
结 论
采用ZIC?-HILIC色谱柱，直接分析可乐样品中的4-甲基咪唑和2-甲基咪唑。方法在0.1～0μg/mL范围内线性关系良好，操作简单，重现性良好。
食安中国
(责任编辑：yangj)
