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日前，从刚刚结束的武汉第11届中国畜牧业博览会传出信息，上海某个知名生物科技企业经过2年潜心研发，于近日成功独创了有别于LAMP的一步恒温扩增技术。该技术基于滚环扩增原理，恒温扩增30分钟即能出结果，实验结果已多次得到验证。该技术的关键在于提供一种引物介导环化的恒温核酸滚环扩增方法，即一种制备单链DNA链的两个引物相关序列末端连接成环且能至少以该两个引物直接启动恒温滚环扩增的方法；且能在一种溶液体系中一次添加完全部试剂后恒温保持一定时间就能完成核酸扩增。
该技术通过内外各2条引物从靶核酸恒温扩增并剥离出的DNA单链目标模板两端可被合适的DNA连接酶，在合适条件下连接形成一个闭合的环化DNA链。带有链置换功能的DNA聚合酶在恒温条件下，以闭合环状DNA为模板启动滚环扩增。滚环扩增产物中不断出现新的DNA单链目标模板，它将不断由DNA连接酶环化并启动新一轮滚环扩增。
与现有技术相比，该新技术实际效果在于：
1）相比现有锁式探针滚环扩增技术，不用再合成高成本的长锁式探针，靶核酸的序列的长度能允许更大；
2）相比现有的酶切式滚环扩增技术，该技术通过引物的设计，能对靶核酸任意序列进行滚环扩增；
3）相比现有的滚环扩增技术及其他的恒温扩增技术（LAMP除外）都需要分步在不同溶液体系中不同温度操作，该技术能在一种溶液体系中一次添加完全部试剂后恒温保持一定时间就能完成扩增，这为扩增产物的封闭扩增，并对防止样品被扩增产物污染提供了解决方法；？
4）相比目前能在一种溶液体系中一次添加全部试剂并恒温扩增的LAMP技术，本技术能提供数量更少更简单的引物设计，有的方法中只要与靶核酸相关的四个引物，有的方法中需要5个与靶核酸相关的引物。鉴于RNA病毒很容易基因变异，即使在保守序列上也存在点突变，数量少的引物就能更便于进行种属范围的特异性设计。
（作者：Tony）
食安中国 (责任编辑：yangj)
