食品着色剂（色素）是以给食品着色为主要目的的添加剂。合成着色剂多以从煤焦油中分离出来的苯、甲苯、萘等为原料经过有机反应而合成，长期过量食用对人体健康具有一定的危害，主要包括致毒性、致突变性与致癌性等。因此，各国对食品中合成着色剂的使用范围和限量都有着严格的规定，我国GB 2760-2011《食品添加剂使用标准》中也对各种合成着色剂的使用和限量做出了明确规定。

　　国标方法GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》中推荐的检测方法有高效液相色谱法、薄层色谱法、示波极谱法，其中应用最广泛的是液相色谱法。本文采用固相萃相-高效液相色谱法对样品前处理方法进行改进，同时优化色谱条件，多波长检测，能更好地满足食品中合成着色剂的检测需要。

　　实验部分

　　1.实验材料

　　（1）仪器

　　Waters 2695液相色谱仪，Waters 2996检测器，固相萃取仪（广州智真SC-8L-150）；SBHCONC型氮吹仪（Stuart 公司）；Hei-vap val旋转蒸发仪（德国）。

　　（2）试剂

　　Waters OASIS WAX固相萃取小柱（6cc/150mg）；甲醇、乙酸铵为色谱纯；氨水、甲酸为分析纯；水为超纯水。

　　（3）标准品

　　标准储备溶液的配制：精密称取按其纯度折算为100%质量的标准品各0.100g，置100mL容量瓶中，加少量水溶解并定容至刻度，配成1.00mg/mL水溶液4℃冰箱保存。

　　标准工作溶液的配制：根据需要准确移取相应标准储备液，用水稀释成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、50.0μg/mL的系列标准工作溶液，临用前配制。

　　2.试样处理

　　液体样品（饮料、酒等）：取样5.0～10.0g，用柠檬酸调PH至5后，待OASIS WAX固相萃取小柱（6cc/150mg）净化。

　　固体样品（蛋糕、蜜饯等）：取样5.0g，用15mL乙醇∶氨水（75∶25）振荡提取两次，合并提取液，浓缩至5mL，PH调节至5后，待OASIS WAX固相萃取小柱（6cc/150mg）净化。

　　OASIS WAX固相萃取小柱使用前依次用6mL甲醇活化，6mL水平衡。将5mL提取液上样至小柱，流速不能超过1mL/min。依次用6mL 0.5%甲酸甲醇溶液、6mL水冲洗小柱，真空抽干小柱，弃去流出液。用6mL 25%氨化甲醇溶液洗脱小柱。收集洗脱液，用氮气吹干，用水定容，经0.45μm滤膜过滤，上机分析。

　　3.色谱条件

　　色谱柱：Waters SymmetryShield C18（250mm×4.6mm，5μm）；柱温：30℃；进样量：10μL；流速：1mL/min；检测波长：254、510、630nm；流动相：甲醇-0.02mol/L乙酸铵溶液，梯度见表1。

　　结果与讨论

　　1.色谱柱的选择

　　本方法比较了Waters SymmetryShield RP18柱（250mm×4.6mm，5μm）、Waters SymmetryShield C18柱（250mm×4.6mm，5μm）二种色谱柱。结果表明，相同条件下C18柱有着更高的灵敏度和更好的分离度，且性能稳定。

　　2.提取方法的选择

　　本法选用Waters OASIS WAX固相小柱，填充物为混合型弱阴离子交换反相吸附剂，对强酸性化合物具有高的选择性和灵敏度，适用于合成着色剂的净化、浓缩。与聚酰胺吸附法相比，简化了操作步骤，缩短了操作时间，且具有较高的回收率。

　　3.波长的选择

　　国标方法GB/T 5009.35-2003中仅用单波长测定不同种类着色剂，降低了某些组分的检测灵敏度和特异性，特别是亮蓝。利用Waters 2996检测器多通道检测功能对各种着色剂在200～800nm范围内分别进行扫描，结果：柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红在254nm处检测，日落黄、诱惑红、偶氮玉红、赤藓红在510nm处检测，亮蓝在630nm处检测。标准色谱图见图1。

　　4.线性范围与检出限

　　对系列标准工作溶液按照上述色谱条件进样分析，以峰面积定量，得到标准溶液浓度与峰面积之间的线性回归方程，方法的检出限按3倍信噪比计算，见表2。

　　5.回收率与精密度

　　在橙汁中加入2种不同浓度的着色剂，依法提取、净化、浓缩，上机检测，计算回收率和精密度（见表3）。结果表明，2种不同浓度下橙汁样品的回收率在86.0%～96.5%之间，RSD在1.6%～4.3%之间。

　　结论

　　本文对GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》前处理方法进行了改进，采用固相萃取-高效液相色谱法进行检测，梯度洗脱，多波长同时检测9种合成着色剂，快速、简便、准确率高、重现性好，线性关系、精密度和准确度均获得满意的结果，能更好地满足食品中合成着色剂的分析检测，具有较高的实际应用价值。
来源：食安中国