□ 上海爱博才思分析仪器贸易有限公司 供稿

　　近日，媒体曝光新西兰农场主在牧场使用双氰胺（Dicyandiamide，DCD），奶牛吃到受污染牧草，导致奶制品中含有双氰胺。新西兰牛奶产品中约有80%销往海外，而目前尚无双氰胺在食品中检测的相关国际和国家标准，引发世界消费者的广泛关注和担忧。经研究，双氰胺可利用LC/MS/MS测定分析，AB SCIEX公司第一时间为广大分析工作者提供了奶制品中DCD快速、准确、灵敏、高效的检测方法。除此之外，还为用户提供三聚氰胺、三聚氰酸等在内的多种类似物质的分析检测方法，为客户提供全套的解决方案。

　　实验内容

　　1.仪器设备和试剂

　　AB SCIEX公司API 4000系统配Ultra100液相，艾杰尔公司Venusil? HILIC（5μm，100A，2.1mm×150mm）色谱柱。

　　双氰胺标准物质（纯品）、乙腈（色谱纯）、醋酸铵（色谱纯）、甲酸（色谱纯）。

　　2.色谱条件

　　流动相A：0.5mmol/L乙酸铵（pH=4.0）；

　　流动相B：乙腈，流速、梯度洗脱见表1;

　　柱温：40℃；

　　进样量：10L。

　　3.质谱条件

　　（1）离子源参数

　　电离模式为ESI+；碰撞气CAD设置8（Medium）；气帘气Curtain Gas设置20Psi；雾化气Gas1/Gas2设置60/50Psi；喷雾电压IS设置5500V；离子源温度TEM设置600℃。

　　（2）化合物参数

　　化合物质谱参数详见表2。

　　4.标准溶液的配制

　　准确称取10±0.1mg双氰胺，用水溶解并定容到10mL棕色容量瓶中，冰箱4℃中保存。准确吸取一定量1mg/mL标准储备溶液，分别用水逐级稀释到相应的浓度（现配现用），为1.0、2、5、10、50、100ng/mL的标准工作浓度。

　　5.样品制备

　　乳粉样品：准确称取1.0（±0.01）g乳粉样品于50mL离心管中，加入2mL水涡旋30s至溶解；

　　液态乳样品：准确称取2.0（±0.01）g。加入8mL乙腈涡旋30s，超声10min，8000r/min离心3min，取上层清液约2mL转移至艾杰尔双氰胺净化管中，涡旋30s，过0.45μm滤膜，由LC/MS/MS测定。

　　结果与讨论

　　1.样品色谱峰

　　根据双氰胺的结构推断其极性很强，在C18上的保留较差，通过对比不同厂家HILIC色谱柱分析双氰胺，得出不同的色谱峰。其中使用Venusil? HILIC得到的色谱峰保留时间、峰型最佳，并且该款色谱柱的性价比最高，所以本实验方法中使用艾杰尔Venusil? HILIC色谱柱分离化合物。图1中可以看到，双氰胺空白基质添加浓度为10ng/mL时的TIC色谱图，保留时间RT在2.48min，并且峰型良好，半峰宽窄，适合实验室常规检验。

　　图1中展示了利用上述实验前处理方法提取双氰胺的色谱图。图中清楚的发现，双氰胺色谱峰不受干扰，所以得到的方法灵敏度高、干扰小。

　　2.仪器灵敏度

　　取空白基质样品，通过标准溶液添加的方式，按照2.5中处理样品，逐级降低浓度，直至仪器不能检出，确定方法的最低检出限（LLOD）及最低定量限（LLOQ）。当双氰胺含量降低至1ng/mL时信噪比（S/N）大于10，定为方法的检出下限和定量下限。

　　3.方法线性及重现性

　　（1）方法线性

　　取牛奶空白基质，按照2.5中处理样品，空白基质添加相当于1.0、2、5、10、50、100ng/mL标准溶液，经采集数据绘制标准曲线。得到双氰胺的标准回归方程y=890.95x-599.85，此时的线性相关系数R=0.9999。

　　（2）结果重现性

　　实验室按照上述样品制备方法处理样品，通过空白基质标准添加的方式重复提取、重复进样的方式，通过添加标准溶液考察方法重现性。通过分别添加1ng/mL和5ng/mL的双氰胺标准溶液，每个样品制备重复5次，采集重复3次（n=15），利用化合物定量离子数据计算方法重现性。结果发现在两种浓度下，双氰胺相对标准偏差分别为4.73%及3.22%。

　　结  论

　　AB SCIEX公司一直致力于为用户提供全方位的解决方案，在"双氰胺"曝光事件发生后，迅速组织国内外专业人员建立相关检测方法，在第一时间为用户提供LC/MSMS测定乳制品中双氰胺从前处理到液相质谱条件及定量方法的整体解决方案。方法的整个分析过程具有通量高、重现性好、稳定性强以及对实验人员要求不高等优点，并且适用于AB SCIEX公司各种检测系统。
来源：食安中国