□ 丁娟娟 纪英华 王冰 蔡麒  沃特世科技（上海）有限公司

　　2013年1月，新西兰牛奶及奶制品被检测出含有少量的有毒物质双氰胺，新西兰政府已经下令禁售含有双氰胺的奶类产品。由于中国是新西兰奶制品的出口大国，所以这一敏感的食品安全问题又一次触动了全中国人民的心。沃特世（Waters?）公司第一时间推出完整解决方案，为广大客户提供有力的分析手段。

　　二氰二氨（俗称双氰胺，缩写为DICY或DCD），是氰胺的二聚体，也是胍的氰基衍生物。双氰胺极性非常大，传统C18色谱柱及HILIC色谱柱均难以保留，对于复杂的奶制品基质来说会与杂质共流出，影响分析目标化合物的定量和定性。沃特世公司BEH Amide系列色谱柱通过三键键合的酰胺基键合相，亲水作用色谱的原理，使得双氰胺得到非常好的保留。

　　实验方法

　　1.样品前处理方法

　　取1g奶粉加10mL1%三氯乙酸溶解并沉淀蛋白，12000转高速离心10min；取2mL上清液上样到SepPak? AC2小柱上（Sep-pak AC2上接30mL储液器，wat011390），按照如下流程操作。方法回收率为91%，具体步骤见图1。

　　2.仪器方法

　　（1）UPLC? 方法

　　仪器：ACQUITY UPLC?；

　　流动相A：0.05%乙酸水；

　　流动相B：0.05%乙酸乙腈；

　　色谱柱：BEH Amide 2.1mm×150mm，1.7μm；

　　流速：0.3 mL/min；

　　柱温：30℃；

　　进样体积：5μL；

　　梯度曲线参数：见表1。

　　（2）MS参数

　　毛细管电压：3.5kV；

　　脱溶剂气温度：400℃；

　　脱溶剂气流速：900L/hr；

　　碰撞气流速：0.2mL/min；

　　具体参数见表2。

　　实验结果

　　双氰胺标准曲线见图2，双氰胺溶剂标准品谱见图3，双氰胺低浓度基质标谱见图4，重现性分析见图5～6。

　　1.检测利器--RADARTM功能

　　检测过程中发现，乳制品基质即使做过净化处理，背景干扰依然很严重，所以在检测过程中开启RADAR功能，实时监测杂质对目标化合物的干扰及背景基质的影响。

　　图7为同时检测目标化合物的多反应检测通道及基质全扫描图，目标化合物双氰胺出峰时间背景干扰不明显，使离子抑制效应减到最低。

　　2.检测利器二--PICs功能（子离子确认扫描）

　　在检测目标化合物的时候发现，物质本身分子量小，乳制品中干扰物质多，干扰严重，不可避免地会出现假阳性的情况，此时会选择高分辨质谱进行分子量和结构的剖析，沃特世Xevo?系列串联四极杆质谱可提供碎片离子信息，使一次进样即可完成化合物的多重定性。

　　由图8～11中分析看出，溶剂标准品和奶粉样品的PICs质谱图中主要碎片离子相同，各碎片离子之间相对强度比也在误差范围内，拟合度匹配良好，可以确认是阳性样品。这样，对于只提供两对离子对比的单一定性方法来说多了一种定性功能，使数据更加准确。

　　结  论

　　双氰胺极性非常大，传统C18色谱柱及HILIC色谱柱均难以保留，而沃特世公司Amide系列色谱柱通过三键键合的酰胺基键合相，亲水作用色谱的原理，使得双氰胺得到非常好保留。而仪器对于复杂基质中残留物的分析又作了更好的诠释，例如用于实时检测背景基质干扰的RADAR功能及多重定性选择的PICs功能，都能很好地应用在我们的实际工作中。

　　来源：食安中国