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β2-受体激动剂是指含氮激素中的苯乙胺类药物（phenethylamines,PEAs）苯乙胺类药物具有苯乙醇胺结构母核，苯环上连接有碱性的β-羟胺侧链。盐酸克伦特罗为国家按兴奋剂管制的β2-受体激动剂，目前，β2-受体激动剂已有20多种，我国禁止所有β2-受体激动剂用于养殖业。近年来，非法使用盐酸克伦特罗（非法用于养殖时俗称“瘦肉精”）饲养生猪事件屡禁不绝，严重危害食品安全和人民群众身体健康。一些不法养殖户转向购买人用盐酸克伦特罗或其他β2-受体激动剂直接饲喂生猪。本文在已有的方法基础上改进了仪器方法，睿科仪器新推出的全自动固相萃取系统,与串联四极杆液质联用系统可以同时测定九种β2-受体激动剂。实验证明该方法快速、简单，灵敏度高，完全达到了国内，欧盟和日本的要求。试剂
标准品化合物的结构见图1。乙腈购买于Fisher公司，甲酸购买于Merck公司，甲酸铵购买于Acros Organics公司，水为Milli Q。
图1. 被测β2-受体激动剂的结构
试样制备与保存
牛、猪肌肉组织：若为冷冻样品，将其放置室温下化冻。从原始样品中取出部分有代表性样品约100g，经组织搅拌机将样品均匀搅碎，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，装入无菌采样袋中，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样（-18℃保存），试样再利用匀质机10000r/min转速下将样品制备均匀。
样品前处理
样品制备
提取
1）称取制备好的样品2.00（±0.02）g，置于50mL离心管中，加入8mL乙酸钠缓冲液，再加入50μLβ-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶，匀质机匀质30s(10000 r/min)，37℃水浴酶解12h。
2）取出后放置室温，加入100μL β-激动剂内标工作溶液(8.7)，100μL β-激动剂加标溶液，加盖后涡旋振荡， 离心10min（5000 r/min），取4mL上清液加入0.1mol/L高氯酸溶液5mL，混合均匀，用高氯酸调节pH值至1±0.3。离心10min（5000 r/min），将全部上清液转移至另一50mL离心管中，用10mol/L氢氧化钠调节pH值至11。
3）加入10mL氯化钠饱和溶液和10mL异丙醇-乙酸乙酯（6+4）混合溶液，加盖至于水平振动器振荡10min。在5000 r/min下离心10min。 转移全部的有机相，在40℃水浴下氮气将其吹干。
4）加入5mL pH=5.2的乙酸钠缓冲溶液，涡旋振荡10s后，进行SPE净化
净化
1）将固相萃取小柱置于固相萃取装置Fotector上，次用5mL 甲醇、3mL水活化小柱；
2）将上述待净化的溶液加入萃取小柱，弃取流出液，然后依次用3mL去离子水，3mL 2%甲酸水溶液(v/v)，3mL甲醇淋洗小柱，弃取流出液，并采用负压抽干小柱；
3）10mL 5%氨水氨化的甲醇溶液洗脱目标物，此时收集洗脱液； 系统自动浓缩定容；
4）往管中加入1mL含0.1%甲酸的5%甲醇溶液复溶样品，涡旋震荡后，滤液待测。
分析条件
样品采用串联四极杆液质联用仪进行分析。
液相条件
采用液相色谱仪，配置有脱气机，二元泵，自动进样器。色谱柱： SB-C18, 2.1×100, 1.8μm。流动相组成：A为10mM Ammonium Formate +0.1% Formic Acid水溶液（用乙酸调节pH值4.5），B为乙腈溶剂。流速0.3mL/min，柱温40℃。梯度洗脱。
质谱条件
串联四极杆质谱仪。在（+）ESI模式下，采集数据，设定质谱参数如下：Capillary 4000V，Drying Gas 11L/min，Neb Press 35 psi，Gas Temp 350℃，碰撞气为高纯氮气，Q1和Q3的分辨率均为单位质量分辨。MRM模式下的参数如下：
| 保留时间 | 化合物 | 母离子 | 子离子 | 驻留时间 (ms) |
碰撞电压 (V) |
碰撞能量 Energy (V) |
| 4.95 | 特布它林 | 226 | 152 | 10 | 100 | 15 |
| 170 | 10 | 100 | 30 | |||
| 4.98 | 齐帕特罗 | 262 | 244 | 10 | 100 | 10 |
| 185 | 10 | 100 | 25 | |||
| 4.98 | 沙丁胺醇 | 240 | 222 | 10 | 100 | 5 |
| 148 | 10 | 100 | 15 | |||
| 5.04 | 塞曼特罗 | 220 | 202 | 10 | 80 | 5 |
| 160 | 10 | 80 | 15 | |||
| 5.80 | 莱克多巴胺 | 302 | 284 | 10 | 100 | 10 |
| 164 | 10 | 100 | 15 | |||
| 6.15 | 妥布特罗 | 228 | 119 | 10 | 100 | 30 |
| 172 | 10 | 100 | 10 | |||
| 6.18 | 克伦特罗 （瘦肉精） |
277 | 203 | 10 | 100 | 10 |
| 259 | 10 | 100 | 5 | |||
| 6.37 | 溴布特罗 | 367 | 349 | 10 | 100 | 10 |
| 293 | 10 | 100 | 15 | |||
| 6.49 | 克仑潘特 | 291 | 203 | 10 | 100 | 15 |
| 273 | 10 | 100 | 5 | |||
| 6.52 | 马布特罗 | 311 | 237 | 10 | 100 | 15 |
| 293 | 10 | 100 | 10 | |||
| 6.83 | 马喷特罗 | 325 | 237 | 10 | 100 | 15 |
| 217 | 10 | 100 | 25 |
表2. MRM模式下的质谱参数
结果与讨论
实际样品添加了2ppb的激动剂，经萃取、净化等步骤，其回收率在80-100%之间。其检测灵敏度, 如瘦肉的灵敏度可达10ppt。
图2. 0.5ppb的β2-受体激动剂测得的谱图
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