大肠菌群是影响饮用水安全的主要因素之一,其检测方法的使用非常重要。为了方便用户对检测方法的选用,本文将传统的LB-BGLB培养基法(简称LB法)、MMO-MUG法(简称MMO法)、XGAL-MUG法(简称XGAL法)进行了比较。LB法和MMO法都是已被官方采用的方法;XGAL法是采用安科生物制品(上海)有限公司开发的一种显色培养基进行检测的方法。这三种检测方法均适用于桶装饮用水中大肠菌群的检测。
XGAL法、MMO法与LB法原理
MMO法检测原理 培养基ONPG被大肠菌群中的β-半乳糖苷酶分解产生邻硝基苯酚后会呈现黄色,所以,若呈现黄色,则表明含有大肠菌群;另外,MUG可被大肠杆菌里的特殊酶—β-葡萄糖醛酸酶分解,若用366nm的紫外线灯照射显荧光,则表明含有大肠杆菌。
LB法检测原理 根据上水试验法,以LB培养基、LB-BGLB培养基、EMB培养基、标准琼脂培养基做推定试验、确定试验、完全试验。
XGAL法检测原理 根据培养基中增殖底物及酶底物X-GAL被β-半乳糖苷酶分解产生游离吲哚后呈现蓝色,判断是否含有大肠菌群;而MUG也可被β-半乳糖苷酶分解,经紫外线照射,若出现青紫色荧光,则含有大肠杆菌。目前,安科生物制品(上海)有限公司可提供成熟产品。
XGAL法、MMO法
与LB法灵敏度比较试验
试验菌株:E.coli一株, Klebsiellapneumoniae一株, Enterobacter cloacae两株, Citrobacter freundii一株;培养时间:LB法按照上水试验方法,XGAL法和MMO法为24小时;判断基准:遵循上水试验方法或按照使用说明书操作。试验
结果见表1。
由表1 可以看出,E . c o l i 和K.pneumoniae在LB法、XGAL法、MMO法上结果非常一致;E.cloacae和C.freundii在LB法里显示的是确定阳性或推定阳性,MMO法里显示,在10-8—10-9范围内都是阳性。
XGAL法、MMO法
与LB法两两比较试验
选取305个样品进行检测试验,结果见表2。
LB法与MMO法的比较 阳性一致数为76个,阴性一致数为195个,合计一致率为88.9%,不一致数为34个,不一致率为11.1%。MMO法呈阳性,而LB法呈阴性的为25个;LB法推定试验呈阴性的为3个,确定试验阶段呈阴性的为7个,完全试验阶段呈阴性的有15个;MMO法呈阴性,LB法呈阳性的有9个。
LB法和XGAL法的比较 阳性一致数为79个,阴性一致数为193个,合计一致率为89.2%,不一致数是33个,不一致率为10.8%。XGAL法呈阳性,LB法呈阴性为27个;LB法的推定试验呈阴性的为7个,确定试验阶段呈阴性的为5个,完全试验阶段呈阴性的为15个;XGAL法呈阴性,LB法呈显阳性的有6个。
MMO法和XGAL法的比较 MMO法和XGAL法的阳性一致数为96个,阴性一致数为194个,合计一致率为95.1%。与LB法相比,一致率较高。
通过试验发现,MMO法和XGAL法检测结果非常接近,XGAL法可以在应急情况下使用或作为MMO法的辅助方法,并且两者灵敏度都比LB法高。由于XGAL培养基中的十二烷基硫酸钠具有阻止革兰氏阳性菌发育的作用,所以XGAL法对微生物的选择性比MMO法更强;XGAL法相对稳定,几乎没有假阳性反应;XGAL法的培养基经灭菌、注入简易容器,操作简单,可大大减少实验人员准备灭菌试管的步骤。