过滤的目的无非是得到滤液或截留的成分。过滤的类型有多种,如膜过滤、筛网过滤、离心过滤等。其中膜过滤的应用有很多种,如针对微生物检测,膜过滤是通过使用一定孔径的滤膜从液体中截留微生物,使该微生物在膜表面生长成为菌落,然后对其进行培养、计数、鉴定等。
该方法可用于饮料的微生物检测,也可用在冲洗水、加工水、污水中的微生物检测,是国外大多数国家公认的最佳微生物检测标准方法之一,广泛应用于环境监测、食品及饮料工业、化妆品等领域。
膜过滤特点
可从大量液体样本中获取少量微生物;从抑制性物质中(如防腐剂)分离微生物;通过过滤获得的微生物可经过培养生长成为可记数菌落,用于微生物的继代培养、转移或鉴别。
膜过滤种类 与食品检测相关的过滤方法有两种,一种是针对可过滤类液体的标准膜过滤技术;另一类是针对气体的H G M F(疏水性网格过滤膜)技术。如在饮料成品及原材料出厂前的微生物污染检测方面,颇尔公司可提供Microcheck系列产品。该系列产品是一类由培养皿与过滤漏斗组成的一次性过滤器,可非常方便的安放于抽真空支架上,无需使用特殊的胶塞或其他接头转换器;与过滤漏斗连接的培养皿可以轻松拆卸,将膜片取出,以便加入颇尔公司的培养基进行微生物培养;过滤漏斗的容量刻度在其外侧,以防止微生物在刻度处产生死体积。
膜过滤操作
颇尔公司提供的膜过滤操作如下(见图1):①收集样品并进行一定的稀释,然后选择合适的培养基,并将其滴入带有无菌吸收垫片的培养皿中,使吸收垫片完全润湿。②将镊子进行火焰消毒,然后从无菌包装中取出滤膜,并置于过滤漏斗中。③对样品容器口部进行火焰消毒,再将样品倒入过滤漏斗中,然后打开真空过滤装置,使样品通过抽真空完全滤过滤膜。④用无菌缓冲液冲洗过滤漏斗,再次打开真空过滤装置,使液体通过抽真空完全滤过滤膜。⑤对镊子进行火焰消毒,取出过滤漏斗中的滤膜。⑥将滤膜置于准备好的培养皿中,在特定温度下培养一段时间。最后进行菌落计数(见图2)、确认,并出具检测报告。
过滤膜选择
在膜过滤法检测微生物中,过滤膜的选择至关重要。根据微生物类型的不同,需要选择不同直径的膜,如细菌通常选择0.45um孔径的膜,酵母菌类(真菌类)通常选择0.8um或0.45um孔径的黑膜。根据菌落颜色的不同,应该选择合适颜色的膜:如菌落颜色为透明、苍白或白色,则应该选择黑膜;如果微生物在培养过程中有色素产生,则应该选择白膜,便于计数;另外,还要考虑到培养基的类型,如果培养基可以导致菌落产生颜色,则应该选择白膜,这样才不至于影响菌落计数。此外,不同的膜有不同的应用范围和特点,如GN-6膜(0.45um混合纤维素酯)是用于微生物分析的一类常规膜,具有低吸附性、良好化学兼容性及使用温度范围广泛的特点;Supor 200是用于水质分析的膜,可在低营养条件下保证微生物的生长。